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Protocols

DNA Ligation Kit <Mighty Mix>

【1-1】プラスミドベクターに外来DNAを挿入する場合【標準プロトコール】

  1. プラスミドベクター [25 fmol; pUC118 DNA(3,162 bp) の場合、約50 ng] およびインサートDNA (25~250 fmol) を含むDNA溶液5~10 μlを用意する*1
  2. 1. のDNA溶液と等量のLigation Mix (5~10 μl) を添加し、ピペッティング等により、よく混合する。
  3. 16℃で30分間*2保温する。
  4. 直ちに形質転換を行う場合には、100 μlのコンピテントセルに10 μl*3の反応液を加える。


  5. *1 TE Buffer (10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、pH8.0) などに溶解してください。
    *2 ライゲーションがおこりにくい場合は時間をのばしてください (~overnight)。
    *3 大量のDNA溶液をコンピテントセルに加える場合はエタノール沈殿によりDNAを回収してから行ってください。
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