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Protocols

DNA Ligation Kit <Mighty Mix>

【2】T-ベクターへのPCR産物のクローニングの場合

  1. T-ベクター [13~25 fmol; pT7Blue T-Vectorの場合、約25~50 ng] およびイン サートDNA (5~250 fmol) を含むDNA溶液*1 5~10 μlを用意する。
  2. 1. のDNA溶液と等量のLigation Mix (5~10 μl)を添加し、ピペッティング等に より、よく混合する。
  3. 16℃で30分間*2 保温する。
  4. 直ちに形質転換を行う場合には、100 μlのコンピテントセルに10 μl*3 の反応 液を加える。


  5. *1 TE Buffer (10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA, pH8.0) などに溶解して下さい。
    *2 T-Vectorを用いてPCR産物の Ligationをおこなう場合は、反応時間は 1時間以内にして下さい。長時間反応させると、バックグラウンドが高くなることがあります。
    *3 大量のDNA溶液をコンピテントセルに加える場合、およびエレクトロポレーションにより形質転換を行う場合はエタノール沈殿によりDNAを回収してから行ってください。
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