DNA Polymerase I (E. coli )

ニックトランスレーション反応

1.以下の反応液を調製する。
鋳型DNA0.05~1 μg
10×E coli DNA Polymerase I Buffer4 μl
dNTP Mixture(0.1 mM dATP, dGTP, dTTP)4 μl
111 TBq/mmol[α-32P]dCTP
(3,000 Ci/mmol)
10 μl
(3.7 MBq, 100 μCi)
DNA Polymerase(5 units/μl)0.8 μl
DNase I(0.0004 units/μl)1 μl
dH2Oup to 40 μl

2.15℃で2時間反応させる。

3. 70℃で5~10分間熱処理する。

そのまま適量をハイブリダイゼーションプローブ液として用いる(必要ならば、ゲルろ過あるいはエタノール沈殿で未反応の標識dCTPを除去する)。

  DNA Polymerase I (E. coli )