PCR条件について
TB Green Premix Ex Taq GC (Perfect Real Time)（製品コード RR071A/B）
PCR条件について
【PCR条件の検討】○反応特異性を上げるには
アニーリング温度を上げると反応特異性が改善することがある。増幅効率とのバランスを確認しながら、検討してください。
アニーリング温度を上げると反応特異性が改善することがある。増幅効率とのバランスを確認しながら、検討してください。
[シャトルPCR]
標準プロトコール
標準プロトコール
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| 60℃ | 30秒 |
→
アニーリング温度を上げる
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| ～64℃ | 30秒 |
○増幅効率を上げるには
伸長時間を延ばすか、3 step PCRに変更することにより、増幅効率が改善することがある。以下の手順で検討してください。
伸長時間を延ばすか、3 step PCRに変更することにより、増幅効率が改善することがある。以下の手順で検討してください。
[シャトルPCR]
標準プロトコール
標準プロトコール
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| 60℃ | 30秒 |
→
伸長時間を延ばす
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| 60℃ | 1分～ |
→
[3 step PCR]
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| 55℃ | 30秒 | |
| 72℃ | 30秒 |
→
伸長時間を延ばす
| 95℃ | 5秒（10秒） | |
| 55℃ | 30秒 | |
| 72℃ | 1分～ |
初期変性は通常95℃、30秒で十分である。環状プラスミドやゲノムDNAなど変性しにくい鋳型でも、ほとんどの場合、この条件で良好に反応できる。鋳型の状態によっては95℃、1～2分程度に延長することが可能であるが、時間が長すぎると酵素の失活を招く恐れがあるので、2分以上の条件は推奨しない。
