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• 血清、血漿、無細胞生体液からのウイルスRNA抽出プロトコール NucleoSpin^® RNA Virus（製品コード 740956.10／740956.50／740956.250）

血清、血漿、無細胞生体液からのウイルスRNA抽出プロトコール NucleoSpin^® RNA Virus（製品コード 740956.10／740956.50／740956.250）

1	試薬の調製	Lysis Buffer RAV1（Carrier RNAを含む）＊1、Buffer RAV3＊2が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
2	サンプルの溶解	サンプル（血清、血漿など無細胞生体液）150 μlにLysis Buffer RAV1(Carrier RNAを含む)＊1を600 μl添加し、vortexでよく混和する。 70℃で5分間インキュベートする。 ※70℃でのインキュベート後、サンプルが濁っている場合は、11,000×gで1分間遠心後の上清を使用する。
3	エタノールの添加	エタノール（96～100%）を600 μl添加し、10～15秒間vortexでよく混和する。
4	カラムへの吸着	Nucleospin RNA Virus Column（青色のリング）をCollection Tubeにセットする。カラムに、2.のサンプルを700 μl添加し、8,000×gで1分間遠心する。ろ液を捨てる。カラムを新しいCollection Tubeにセットし、残りのサンプルを添加し、8,000×gで1分間遠心する。 ろ液を捨てた後、新しい2 mlのCollection Tubeにカラムをセットする。
5	メンブレンの洗浄	1回目の洗浄 Wash Buffer RAW500 μlをカラムに添加し、8,000×gで1分間遠心する。ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeをセットする。 2回目の洗浄 Wash Buffer RAV3*2 600 μlをカラムに添加し、8,000×gで1分間遠心する。カラムを新しいCollection Tubeにセットする。 3回目の洗浄 Wash Buffer RAV3*2 200 μlを添加し、11,000×gで2～5分間遠心する。
6	RNAの溶出	カラムを1.5 mlのマイクロチューブ（各自で用意）にセットする。 あらかじめ70℃に温めておいたRNase-free H2O 50 μlをカラムに加え、室温で1～2分間静置する。 11,000×gで1分間遠心する。 溶出したRNA溶液は、－20℃または－70℃で保存する。

*1	Lysis Buffer RAV1（Carrier RNAを含む）
	Lysis Buffer RAV1 1 mlを Carrier RNAのチューブに加え、Carrier RNAを溶解する。溶解したCarrier RNA溶液をLysis Buffer RAV1のボトルに戻し、混合する。 Carrier RNAを含むLysis Buffer RAV1溶液は、室温で1～2週間保存可能。4℃では4週間、長期で保存する場合は、－20℃で保存する。 4℃以下で保存した場合、沈殿を生じる場合がある。その場合は、溶液を40～60℃で温めて（5分以内）沈殿を溶解してから使用する。

*2	Buffer RAV3の調製法
	製品コード 740956.10（10回用）の場合：Wash Buffer RAV3 (Concentrate) 6 mlに96～100％エタノール 24 mlを添加する。

＜注意＞
使用時には、詳細は必ず添付の英文説明書を確認すること。

＊2は、製品コード 740956.10（10回用）の場合の調製法である。
製品コード 740956.50（50回用）、740956.250（250回用）の場合の調製法は英文説明書を参照すること。

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