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Protocols

NucleoSpin® RNA Plus XS

微量の培養細胞・組織からのRNA抽出プロトコール

NucleoSpin RNA Plus XS(製品コード 740990.10/.50/.250)
試薬の準備 Buffer WB2*1が添付の英文説明書に従って調製、希釈されていることを確認する。
1.サンプルの溶解
試料にBuffer LB1 100 μlを添加し、均一にホモジナイズして溶解する。試料はなるべく細かく破砕し、完全に溶解させることが望ましい。還元剤の添加は必要ない。
Buffer LB2 100 μlを加えて混合する。
2.ゲノムDNAの除去と
ライセートのろ過
NucleoSpin gDNA Removal Column XS(黄色のリング)を2 ml Collection tubeにセットする。1.のライセートをカラムに添加し、100×g、2分間、引き続き11,000×g、10秒間遠心する。カラムに液が残っている場合は再度遠心し、液を完全にろ過する。
3.吸着条件の調整
カラムを取り除き、ろ液にBinding Solution BSXS 150 μlを添加し、よく混合する。
4.カラムへの吸着
NucleoSpin RNA Plus XS Column(水色のリング)を用意する。
3.の溶液をカラムに添加し、300×g、1分間、引き続き11,000×g、10秒間遠心する。ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにカラムをセットする。あるいは、新しいCollection Tube(2 ml:各自で用意)にセットしてもよい。
5.メンブレンの洗浄






1回目の洗浄
Buffer MDB 100 μlをカラムに添加し、11,000×gで10秒間遠心する。
カラムを新しいCollection Tube(2 ml)にセットする。
2回目の洗浄
Buffer WB2*1 500 μlをカラムに添加し、11,000×gで10秒間遠心する。
ろ液を捨てた後、再び同じCollection Tubeにカラムをセットする。
3回目の洗浄
Buffer WB2*1 200 μlをカラムに添加し、最高速(20,000×g以下)で2分間遠心して、カラムを乾燥させる。
カラムを新しいCollection Tube(1.5 ml)にセットする。
6.RNAの溶出
カラムをマイクロチューブ(1.5 ml:各自で用意)にセットする。
RNase-free H2O*2 10~20 μlをカラムに加え、11,000×gで1分間遠心する。溶出したRNA溶液は、-20℃または-70℃で保存する。
*1
Buffer WB2
製品コード 740990.10(10回用)の場合:Wash Buffer WB2(Concentrate) 6 mlに96~100%エタノール 24 mlを添加する。
製品コード740990.50(50回用)、740990.250(250回用)の場合の調製法は英文説明書を参照すること。

*2
RNase free waterの液量は 5~30 μlで行うこともできる。詳細は英文説明書を参照すること。

<注意>
使用前には、詳細なプロトコールは必ず添付の英文説明書で確認すること。
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