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黄色ブドウ球菌検出用 Primer Set

黄色ブドウ球菌
エンテロトキシン遺伝子および、毒素性ショック症候群毒素遺伝子の検出

黄色ブドウ球菌のエンテロトキシンの各遺伝子の陽性株を用いた実験例および、黄色ブドウ球菌の毒素性ショック症候群毒素1型遺伝子陽性株と各エンテロトキシン遺伝子陽性株を用いた実験例を示す。
反応液組成
専用10×PCR Buffer*1 5 μl
dNTP Mixture(各2.5 mM)*2 4 μl
Primer-1 0.5 μl
Primer-2 0.5 μl
Template DNA*3 5 μl
TaKaRa Taq(5 U/μl)*4 0.25 μl
滅菌水 34.75 μl
Total 50 μl

反応液は氷冷下で調製する。

*1 特殊細菌検出用Primer Set(製品コード S001~S028)に添付している。
*2 TaKaRa Taq(製品コード R001A)に添付している。
*3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をブレインハートインフュージョン培地中(図1)またはLB培地中(図2)で37℃、一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer(10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0)または滅菌水90 μl加え、95℃、5分間加熱後、卓上遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
*4 TaKaRa Taq(製品コード R001A)のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version(製品コード R007A)も使用できる。

PCR条件
熱変性 94℃、1 min 35 cycles
アニーリング 55℃、1 min
伸長 72℃、1 min
結果
(A)エンテロトキシンA遺伝子
(使用プライマーSEA-1、-2)
(B)エンテロトキシンB遺伝子
(使用プライマーSEB-1、-2)

C)エンテロトキシンC遺伝子
(使用プライマーSEZ-1、-2)
(D)エンテロトキシンD遺伝子
(使用プライマーSED-1、-2)

(E)エンテロトキシンE遺伝子
(使用プライマーSEE-1、-2)

Lane M: φX174-Hinc II digest
1: 黄色ブドウ球菌エンテロトキシンA遺伝子およびD遺伝子陽性株
2:      〃      A遺伝子陽性株
3:      〃      A遺伝子およびD遺伝子陽性株
4:      〃      A遺伝子陽性株
5:      〃      A遺伝子およびB遺伝子陽性株
6~8:      〃      B遺伝子陽性株
9、10:      〃      C遺伝子陽性株
11:      〃      C遺伝子およびD遺伝子陽性株
12:      〃      C遺伝子陽性株
13:      〃      D遺伝子陽性株
14:      〃      A遺伝子およびD遺伝子陽性株
15、16:      〃      D遺伝子陽性株
17:      〃      E遺伝子陽性株

図1 黄色ブドウ球菌のエンテロトキシン遺伝子の検出
3%アガロースゲル(エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む)による電気泳動の結果

Lane M: φX174-Hinc II digest
1: 黄色ブドウ球菌毒素性ショック症候群毒素
1型遺伝子陽性株
2: 黄色ブドウ球菌エンテロトキシンA遺伝子陽性株
3:        〃        B遺伝子陽性株
4:        〃        C遺伝子陽性株
5:        〃        D遺伝子陽性株
6:        〃        E遺伝子陽性株

図2 黄色ブドウ球菌毒素性ショック症候群毒素(TSST-1)遺伝子の検出
  3%アガロースゲル(エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む)による電気泳動の結果

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