コレラ毒素検出用 Primer Set VCT-1 & 2

コレラ毒素遺伝子の検出

コレラ菌(コレラ毒素遺伝子陽性株および陰性株)および毒素原性大腸菌(易熱性エンテロトキシン遺伝子陽性株)を用いた実験例を示す。

反応液組成

専用10×PCR Buffer*15 μl
dNTP Mixture(各2.5 mM)*24 μl
Primer-10.5 μl
Primer-20.5 μl
Template DNA*35 μl
TaKaRa Taq(5 U/μl)*40.25 μl
滅菌水34.75 μl
Total50 μl

反応液は氷冷下で調製する。

*1 特殊細菌検出用Primer Set(製品コード S001~S028)に添付している。
*2 TaKaRa Taq(製品コード R001)に添付している。
*3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をLB培地中で37℃、 一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer(10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0)または滅菌水を90 μl加え、 95℃、5分間加熱後、卓上遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
*4 TaKaRa Taq(製品コード R001A)のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version(製品コード R007A)も使用できる。

PCR条件

熱変性94℃、1 min35 cycles
アニーリング55℃、1 min
伸長72℃、1 min

結果

図1 コレラ毒素遺伝子の検出
3%アガロースゲル (エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む) による電気泳動の結果
Lane M:φX174-Hinc II digest
1~3:コレラ菌(エルトール・小川型、コレラ毒素遺伝子陽性株)
4~6:コレラ菌(エルトール・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陽性株)
7:コレラ菌(古典・小川型、コレラ毒素遺伝子陽性株)
8:コレラ菌(古典・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陽性株)
9~10:コレラ菌(non-Ol、コレラ毒素遺伝子陽性株)
11:コレラ菌(エルトール・小川型、コレラ毒素遺伝子陰性株)
12:コレラ菌(エルトール・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陰性株)
13:毒素原性大腸菌(LT遺伝子陽性株)

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