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Application

ウェルシュ菌検出用 Primer Set CPE-1 & 2

ウェルシュ菌毒素遺伝子の検出

種々のClostridium属の菌の熱抽出サンプルを鋳型にPCRを行った結果を示す。
反応液組成
専用10×PCR Buffer*15 μl
dNTP Mixture(各2.5 mM)*24 μl
Primer-10.5 μl
Primer-20.5 μl
Template DNA*35 μl
TaKaRa Taq(5 U/μl)*40.25 μl
滅菌水34.75 μl
Total50 μl

*1 特殊細菌検出用Primer Set(製品コード S001~S028)に添付している。
*2 TaKaRa Taq(製品コード R001A)に添付している。
*3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をGAMブイヨン培地中で37℃、一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer(10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0)または滅菌水を90 μl加え、95℃、5分間加熱後、遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
*4 TaKaRa Taq(製品コード R001A)のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version(製品コード R007A)も使用できる。

PCR条件
熱変性94℃、1 min35 cycles
アニーリング55℃、1 min
伸長72℃、1 min
結果

図1 ウェルシュ菌毒素遺伝子の検出
  3%アガロースゲル(エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む)による電気泳動の結果

Lane M:φX174-Hinc II digest
1~7:ウェルシュ菌(Clostridium perfringens)毒素陽性株
8~9:ウェルシュ菌(Clostridium perfringens)毒素陰性株
10:Clostridium difficile
11:Clostridium sporogenes
12:Clostridium barati
13:Negative control
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