Pfu Methionine Aminopeptidase

ヒトフィブロネクチンフラグメントC281（M.W.=33,000）を遺伝子組換えにより大量発現すると、大多数のタンパク質ではN末端メチオニンが付加したままの状態となる。そこ で本タンパク質にPfu Methionine Aminopeptidaseを作用させ、N末端メチオニンの除去を試みた。

ヒトフィブロネクチンフラグメントC281（基質）：Met-Ala-Pro-Thr-Asp-Leu-…

反応条件
　基質：680 pmol
酵素：2 mU
溶媒：0.2 mM CoCl₂を含む10 mM PIP ES、pH7.5
　液量：200 μl
　　　 ↓75℃で5時間保温
　 シークエンサーでアミノ酸配列分析

ヒトフィブロネクチンフラグメントC281をPfu Methionine Aminopeptidaseで処理した場合と処理しなかった場合のN末端アミノ酸配列分析の結果を示す（表2、3）。本酵素処理により主成分のタンパク質のN末端メチオニンのみが除去できた。

表2　未処理
Major	Met	Ala	Pro	Thr	Asp	Leu
（pmol）	137.6	156.6	154.7	109.8	126.5	151.8
Minor*			Pro	Thr	Asp	Leu
（pmol）			51.4	18.5	50.1	68.1
表3 処理済
Major	-	Ala	Pro	Thr	Asp	Leu
（pmol）		103.5	83.4	61.3	58.9	83.5
Minor*			Pro	Thr	Asp	Leu
（pmol）			61.3	65.6	53.9	71.2
*微量成分でN末端がプロリンであるものは、E.coli菌体中で発現後、 一部N末端メチオニンが宿主の Methionine Aminopeptidaseで 除去された後、非特異的アミノペプチダーゼでさらにアラニンが 除去されたためと推測される。