Pyrobest™ DNA Polymerase

大腸菌2 kbの増幅反応での感度


大腸菌のゲノムDNAを鋳型として2 kbの増幅反応を種々の量の鋳型を用いて行った。

Template

JM109ゲノムDNA

:10 pg, 100 pg, 1 ng/50 μl

酵素量

Pyrobest

DNA Polymerase

:1.25 U/50 μl

S社DNA Polymerase

:1.25 U/50 μl

PCR反応条件:

94℃ 30 sec
58℃ 30 sec
72℃ 1 min 30 sec 



30 cycle

サーマルサイクラー

:TaKaRa PCR Thermal Cycler MP

ゲル

:1% Agarose L03「TAKARA」(製品コード 5003)

アプライ量

:5 μl/50 μl反応液

レーン

1:

Pyrobest

DNA Polymerase/Pyrobest Buffer

2:

Pyrobest

DNA Polymerase/Pyrobest Buffer II

3:

S社DNA Polymerase

M:

pHY Marker



Pyrobest

Buffer IIを用いて反応を行うことにより、今までのbufferでは増幅産物の認められなかった10 pg/50 μlの鋳型量においても増幅が確認された。また、100 pg/50 μl, 1 ng/50 μlの鋳型量においても増幅産物量の増大が認められた。一方、S社DNA Polymeraseは、このターゲットの増幅に関しては適さないようで、1 ng/50 μlの鋳型量においても増幅が確認できなかった。

  Pyrobest™ DNA Polymerase