検出例 (3) Thermal Cycler Dice Real Time Systemを使用
【方法】
- 測定遺伝子
ターゲットA ：human GAPD
ターゲットB ： human CYP2C9 - プライマーおよびプローブ
TaqMan Gene Expression Assays（Thermo Fisher Scientific社）のプライマーとプローブを使用した。 - 検量線作成用鋳型の調製
ヒト肝臓由来のtotal RNA 500 ng を用いて、PrimeScript RT reagent Kit（Perfect Real Time）のPrimeScript RTase（RNase H free）による逆転写反応（10 μl 系）を行った後、EASY Dilution（for Real Time PCR）を用いて10倍希釈の段階希釈液を作製した。
この段階希釈液を用いて、total RNA 10 pg～100 ng に相当するcDNA を鋳型として用い、ターゲット遺伝子に対する検量線をそれぞれ作成した。
・Thermal Profile Setup
Premix Ex Taq（Perfect Real Time）のThermal Cycler Dice Real Time System 用標準プロトコールに従った。
【結果】
プローブを用いた場合も精度の高い検量線が作成でき（下図）、検量線法による相対定量解析が可能です。
ターゲットA
ターゲットB
一次増幅曲線
ターゲットB
ターゲットA（青）：R2＝0.999 Eff＝106.8％
Y＝－3.170×log（X）＋39.58
ターゲットB（赤）：R2＝0.999 Eff＝109.3％
Y＝－3.117×log（X）＋39.25
