Tks Gflex™ DNA Polymerase

M：Ladder Marker 1：クローンA 2：クローンB 3：クローンC 4：クローンD 5：クローンE （取得したクローンの結果を抜粋して掲載）

マウスES細胞のゲノムDNAに目的DNA断片を相同組換えにより導入する実験を行った。ターゲティングベクター導入（transfection）により薬剤耐性となったコロニーを96穴プレートにピックアップし、各ウェルにLysis Buffer^*を添加しクルードサンプルを調製後、Tks Gflex DNA Polymeraseを用いて推奨通りの反応組成でPCRを行った。
サンプル調製のプロトコールはこちら。

＊	本実験ではユーザー様ご自身でLysis Bufferを調製・使用されました。Buffer組成は弊社製品（Lysis Buffer for PCR（製品コード 9170A））と同じものですが、弊社プロトコール（試料をLysis Bufferに添加後、Proteinase Kを添加）ではなく、Lysis BufferとProteinase Kを混合したものを試料に添加しています。Buffer組成の詳細はこちらをご参照ください。 注：クルードサンプルに使用するLysis Bufferを自製する場合は、濃度変更が結果に大きく影響しますので、必ず開示通りの組成で調製してください。

PCR条件：

94℃		1 min
98℃ 60℃ 68℃		10 sec. 15 sec. 60 sec./kb （180sec.）		35 cycles

結果
103クローン中、10クローンが相同組換えES細胞株であることをLysis BufferとTks Gflexを用いたクルードサンプルからのPCRで確認した。

ご感想：
ES細胞で相同組換えやCRISPR/Cas9を用いたmutagenesisを行う場合、PCRによるスクリーニングでは多数のクローンを同時進行で処理する必要があるため、、各クローン細胞株の細胞数などをそろえるなど「最適化」することは極めて面倒です。Tks Gflex DNA Polymeraseは、「クルードサンプルからのPCRができる」、「鋳型の条件がバラついても結果に大きな影響がない」、「PCRサイクル条件を検討しなくても、ほぼ同一条件で安定している」、「サイクル数を増やしても非特異的増幅を認めない」などの条件をすべて満たす「最適化不要」な非常に優秀なPCR酵素としてお勧めできる製品です。
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