製品説明

TaKaRa Ex Taqは、LA PCRの原理を応用した3’→5’exonuclease活性（proof reading活性）を持つ耐熱性DNA Polymeraseである。通常のPCR条件下において、従来のTaq DNA Polymeraseと比べて、高い増幅効率、低いエラー率で高感度のPCRを実現できる。
本製品で使用しているTaKaRa Ex Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa Ex Taqを混合したもので、ホットスタートPCR用の酵素である。高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合しポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。抗Taq抗体はPCRの最初のDNA変性ステップで変性するため、特別な変性ステップは必要なく、従来のPCR条件で使用できる。

内容

（250 U）

TaKaRa Ex Taq HS （5 U/μl）	50 μl
10×Ex Taq Buffer （20 mM Mg2＋ plus）	1 ml
dNTP Mixture （各2.5 mM）	800 μl

保存

−20℃

形状

20 mM	Tris-HCl （pH8.0）
100 mM	KCl
0.1 mM	EDTA
1 mM	DTT
0.5％	Tween 20
0.5％	Nonidet P-40
50％	Glycerol

添付dNTP Mixture*

濃度	各2.5 mM
形状	水溶液（ナトリウム塩）pH7〜9
純度	各98％以上

* dATP、dCTP、dGTP、dTTPの等モル混合物で、希釈せずにそのままPCR反応に用いることができる。

活性の定義

活性化サケ精子DNAを鋳型 /プライマーとして用い、下記の活性測定用反応液中にて74℃において、30分間に10 nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む活性を1 Uとする。

活性測定用反応液組成

25 mM	TAPS緩衝液 （pH9.3、25℃）
50 mM	KCl
2 mM	MgCl2
0.1 mM	DTT
各200 μM	dATP・dGTP・dCTP
100 μM	[3H]-dTTP
0.25 mg/ml	活性化サケ精子DNA

純度

●10 Uの本酵素と0.6 μgのλ-Hind III分解物とを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのsupercoiled pBR322 DNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。
●10 Uの本酵素と0.6 μgのλDNAとを74℃、1時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化は起こらない。

用途

Hot Start Polymerase Chain Reaction (PCR)法によるDNA増幅

PCR産物について

TaKaRa Ex Taq HSを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vector［pMD20（製品コード 3270）、pMD19 (Simple)（製品コード 3271）など］にクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。

PCR検定

●λDNAを鋳型としたPCR反応(増幅産物 20 kb)において良好な増幅が見られることを確認している。
●ヒトゲノムDNAを鋳型としたsingle copy geneのPCR反応(増幅産物 17.5 kb)において良好な増幅がみられることを確認している。
●55℃、10分間の反応での抗体によるEx Taq 活性の阻害率が90％以上であることを確認している。

一般的なPCR反応液量（Total 50 μl）

TaKaRa Ex Taq HS（5 U/μl）	0.25 μl
10 × Ex Taq Buffer（Mg2+ plus）	5 μl
dNTP Mixture（各2.5 mM）	4 μl
Template	＜500 ng
Primer 1	0.2〜1.0 μM （final conc.）
Primer 2	0.2〜1.0 μM （final conc.）
滅菌蒸留水	up to 50 μl

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