高速シーケンサー用の定量試薬

CycleavePCR® Library Quantification Kit

メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
TKR 5500 5500 CycleavePCR® Library Quantification Kit (for Illumina)
  • ライセンス
50回 ¥67,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

CycleavePCR Library Quantification Kitは、イルミナ社の次世代シーケンサー用のライブラリーを、リアルタイムPCR装置を用いて定量するためのキットである。イルミナ社の次世代シーケンサーに用いられるアダプター配列を特異的に認識するプライマー・プローブと専用のスタンダードDNAを用いるため、アダプターが連結していないDNA分子が混在していても、シーケンサーで解析対象となるアダプターが連結したDNA分子のみを定量可能である。また、ライブラリーの調製過程において、ライブラリーとアダプターの連結の確認に用いることもできる。
増幅産物の検出にはサイクリングプローブ法を採用している。サイクリングプローブ法は、RNAとDNAからなるキメラプローブとRNase Hの組み合わせによる高感度な検出方法である。

図1.サイクリングプローブ法の原理

※サイクリングプローブ法の原理について詳しくは、 こちらをご確認ください。
CycleavePCR Library Quantification Kitで定量できるのは以下のキットで調製したライブラリーである。

No. キット名 メーカー カタログ番号
1

TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 - Set A

イルミナ

RS-122-2001

2 TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 - Set B イルミナ RS-122-2002
3 Mate Pair Library Prep Kit v2 イルミナ PE-112-2002
4 TruSeq DNA PCR-Free LT Sample Prep Kit-Set A イルミナ FC-121-3001
5 TruSeq DNA PCR-Free LT Sample Prep Kit-Set B イルミナ FC-121-3002
6 TruSeq Nano DNA LT Sample Prep Kit-Set A イルミナ FC-121-4001
7 TruSeq Nano DNA LT Sample Prep Kit-Set B イルミナ FC-121-4002
8 TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit-Set A イルミナ RS-122-2101
9 TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit-Set B イルミナ RS-122-2102
10 TruSeq Stranded Totoal RNA with Ribo-Zero LT Sample Prep
Kit-Set A
イルミナ RS-122-2201
11 TruSeq Stranded Totoal RNA with Ribo-Zero LT Sample Prep
Kit-Set B
イルミナ RS-122-2202
12 TruSeq Stranded Totoal RNA with Ribo-Zero Gold LT Sample
Prep Kit-Set A

イルミナ RS-122-2301
13 TruSeq Stranded Totoal RNA with Ribo-Zero Gold LT Sample
Prep Kit-Set B
イルミナ RS-122-2302
14 SureSelectXT Target Enrichment System アジレントテクノロジーズ
15 NEBNext Singleplex Oligos for Illumina NEB E7350S、E7350L
16 NEBNext Multiplex Oligos for Illumina NEB E7335S、E7335L、
E7500S、E7500L

内容

CycleavePCR Library Quantification Kit(製品コード 5500)[25 μl反応系×50回分]
2×Cycleave Reaction Mixture*1625 μl
Primer/Probe Mix(FAM)(5×conc.)*2 *6250 μl
EASY Dilution*31 ml×5
dH2O1 ml
ROX Reference Dye(50×conc.)*4 *625 μl
ROX Reference Dye II(50×conc.)*4 *625 μl
Standard (10 pM)*550 μl

*1酵素、BufferとdNTP mixtureを含むPCR反応試薬
*2PCR反応に用いるプライマーとプローブの混合溶液
*3 スタンダードDNA とライブラリーDNA の希釈用溶液
単品でも購入可能:EASY Dilution (for Real Time PCR)(製品コード 9160)
*4Thermo Fisher Scientific社のリアルタイムPCR装置など、ウェル間の蛍光シグナルの補正を行う装置で解析する場合に使用する。
  • ROX Reference Dyeを添加する機種
    StepOnePlus Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)
  • ROX Reference Dye II を添加する機種
    Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)
  • 添加の必要がない機種
    Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ(製品コード TP900/TP960など)
*5 ライブラリー定量を行う際の検量線の作成に用いる10 pM スタンダードDNA溶液。 Cycleave qPCR定量用にデザインされているため、他のリアルタイムPCR手法に用いた場合、定量の誤差や不良を引き起こすことがある。
*6蛍光標識プローブのため遮光に留意すること。

保存

-20℃

キット以外に必要な試薬、機器(主なもの)

【機器】
リアルタイムPCR装置および専用チューブ
・Thermal Cycler Dice Real Time System II (Software Ver. 3.00 以降)(製品コード TP900/TP960)
・Thermal Cycler Dice Real Time System Lite(製品コード TP700/TP760)
チューブ1本ごとにフラットキャップが付いているキャップ付き0.2 ml 8連チューブ をThermal Cycler Dice Real Time System専用として販売している。チューブ間のコンタミネーションの危険性を軽減できる。
0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps(製品コード NJ600)
・StepOnePlus Real-Time PCR System
Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific社)など

【その他】
1,000 μl、200 μl、20 μl、10 μl 各マイクロピペット
マイクロピペット用チップ(疎水性フィルター付)
卓上遠心機
微量高速遠心機(4℃設定可能)

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