イルミナ社次世代シーケンサー用ライブラリー定量キット

Library Quantification Kit

  • イルミナ社次世代シーケンス用ライブラリーの定量キット
  • 最適なライブラリー使用量が確定でき、質の高いシーケンス結果の取得に貢献
  • qPCR法を採用しているので低濃度のライブラリーも定量可能
  • アダプター付加のDNA断片のみを正確に定量
  • プライマー、リアルタイムPCR試薬、検量線作成用スタンダードを含む完全なキット
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 638324 Z8324N Library Quantification Kit
  • ライセンス
500回 ¥75,000
30%OFFクーポン配布中!
価格改定(値下げ)しました
2015年10月13日
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 638325 Z8325N DNA Standards for Library Quantification
50回 ¥45,300
30%OFFクーポン配布中!
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

イルミナ社次世代シーケンス解析で質の高いデータを得るには適切な量のライブラリーDNAを用いることが不可欠である。使用するライブラリーDNAの量が不十分だとクラスター密度が低くなり、得られるシーケンスデータ量が少なくなる。ライブラリーDNAの量が多すぎるとクラスター密度が高くなり、得られるデータの質が下がる。電気泳動や分光光度測定に基づく一般的なNGSライブラリー定量方法は感度が低く、アダプターが付加された配列だけを特異的に測定することができない。また、多くの場合、定量には大量のライブラリーサンプルが必要となる。
Library Quantification Kitは、qPCR法に基づいて、イルミナ社NGS反応に使用されているアダプター配列を特異的に検出する高感度なライブラリーDNA定量キットである。本製品は、ライブラリー中にアダプターが付加されていないDNA分子が混じっている場合も、特異的にライブラリー濃度を測定することができる。また、ライブラリー作製の過程で、アダプターライゲーションの確認に利用することも可能である。
本製品はSYBR Greenを用いたqPCR法のキットで、増幅した二本鎖DNA量に応じてSYBR Greenの蛍光が検出される。本製品には濃度既知の検量線作成用のスタンダードDNAが含まれており、ライブラリーDNAの絶対定量を行うことが可能である。また、スタンダードDNA(DNA Standards for Library Quantification、製品コード 638325)のみの販売も行っている。
一般的なRNA-Seqのワークフロー
一般的なRNA-seqのワークフロー

DNA Standerdsのロット差の検定
図1.DNA Standardsのロット差の検定
3ロットのDNA Standardsを希釈し(0.01、0.1、1.0、10 pM)、Terra qPCR Direct SYBR Premixを用い、Library Quantification Kitの説明書に従ってリアルタイムPCRを行った。
全ての反応はN=3で行い、Ct値(SDM)の平均値を求めた。ロット間の差は5%以下であった。

内容

Library Quantification Kit(製品コード 638324)

  • Terra qPCR Direct SYBR Premix
    2X Terra qPCR Direct SYBR Premix1 ml×5
    ROX Reference Dye LSR(50X)200 μl
    ROX Reference Dye LMP(50X)200 μl
  • Primer Mix Kit
    5X Primer Mix1 ml×2
    EASY Dilution Buffer1 ml×3
    RNase-Free Water1 ml×3
  • DNA Standards for Library Quantification(製品コード 638325)
    DNA Standard(10 pM)50 μl×2
    DNA Standard(1 pM)50 μl×2
    DNA Standard(0.1 pM)50 μl×2
    DNA Standard(0.01 pM)50 μl×2

反応を確認しているリアルタイムPCR装置

  • Thermal Cycler Dice Real Time Systemシリーズ(製品コード TP900/TP960ほか)
  • LightCycler(キャピラリータイプ)(Roche Diagnostics社)
  • Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System
    Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System(以上、Life Technologies社)
  •         その他の装置についてはお問い合わせください。

保存

Terra qPCR Direct SYBR Premix:-70℃(融解後は4℃で6ヵ月保存可能)
その他:-20℃

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注意事項
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