50 pg DNAから1チューブ、2時間のライブラリー調製

ThruPLEX® DNA-seq Kit

  • 微量DNAサンプル(50 pg~50 ng)から、イルミナ社NGS用ライブラリーを作製
  • 1チューブ、2時間の調製時間、3 stepの迅速でシンプルなワークフロー
  • 主要なTarget Enrichmentプラットフォームに対応
    -Agilent SureSelect、Roche NimbleGen SeqCap EZ、IDT xGen Lockdown Probes等
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別)
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参考
資料
CLN R400523 RB4523 ThruPLEX® DNA-seq 6S(12) Kit
  • NGS関連 サマーキャンペーン
12回 ¥93,000
¥74,400
2017/07/03~
2017/08/31

説明書・データシート・ベクター情報
CLN R400428 RB4428 ThruPLEX® DNA-seq 12S(48) Kit
48回 ¥322,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN R400427 RB4427 ThruPLEX® DNA-seq 48S Kit
48回 ¥354,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN R400406 RB4406 ThruPLEX® DNA-seq 48D Kit
48回 ¥322,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN R400407 RB4407 ThruPLEX® DNA-seq 96D Kit
96回 ¥548,000
説明書・データシート・ベクター情報

※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。

プロトコール:SureSelect XTとの組合せ
プロトコール:SeqCap EZとの組合せ

製品説明

ThruPLEX DNA-seq Kitは、ThruPLEXケミストリーを用いて、わずか50 pgの微量DNAからduplicate率が少なく、多様性の高いNGS用ライブラリーを作製するキットである。キットには、イルミナ社次世代シーケンサーに対応したデュアルインデックス(製品コード R400406、R400407)、またはシングルインデックス(製品コード R400427、R400428、R400523)が含まれており、マルチプレックスが可能である。インデックスは、マルチプレート(製品コード R400406、R400407、R400427)、またはチューブ(製品コード R400428、R400523)に分注されている。本キットの操作には、精製やサンプルの移し替えのステップは含まれておらず、同一チューブ、または同一ウェル内で反応を行うことができ、操作は約2時間で完了する。
本製品は、均一なGCカバレッジと分子複雑性の向上により、少ないInput量から再現性の高い結果を得ることができる。また、ゲノムDNA、cell-free DNAなどの生体液由来DNA、FFPE DNA、cDNAなどの二本鎖DNAが使用可能で、ChIP-Seq、RNA-Seqを含む様々なDNA-Seqに利用することができる。更に、主要なTarget Enrichmentプラットフォームにも対応している。

製品名製品コードインデックスの種類
ThruPLEX DNA-seq 6S (12) KitR4005236種類シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 12S (48) KitR40042812種類シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 48S KitR40042748種類シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 48D KitR40040648種類デュアルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 96D KitR40040796種類デュアルインデックス

図1. ThruPLEX DNA-seq Kitの1チューブワークフロー
ThruPLEX DNA-seq Kitのワークフローは、エンドリペア、アダプターライゲーション、ライブラリー増幅の3ステップで構成されており、わずか50 pgの二本鎖DNA/cDNAから、インデックスが付加されたライブラリーを調製できる。全操作は1チューブ内で行えるため、サンプルロスを防ぎ、約2時間でライブラリー作製が完了する。


図2.ThruPLEX DNA-seq Kitのテクノロジー
Step 1:断片化二本鎖DNA(50 pg~50 ng)のエンドリペア
Step 2:Stem-LoopアダプターのBlunt-endライゲーション
Stem-Loopアダプターは5’末端がブロックされており一本鎖部分がないためアダプター同士のアニーリングやライゲーションは起こらず、バックグラウンドを抑えることができる。
Step 3:ライブラリー増幅
ライゲーション後にStem-Loopアダプターを切断することによってバックグラウンドを抑え、正確性の高いライブラリー増幅を行うことができる。

図3.ライブラリーの多様性とduplicateの割合
各社ライブラリー作製キットを用いてライブラリーを作製し、MiSeq v3 Reagent Kitを用いてライブラリーの多様性とduplicateの割合を比較した。ThruPLEX DNA-seq Kitは少ないinput量からライブラリーが作製でき、多様性が高く(左図)、duplicateの割合も低かった(右図)。


図4.GCカバー率の比較
各社ライブラリー作製キットを用いてヒトゲノムDNA 50 ngよりライブラリーを作製しGCカバー率を調べた。ThruPLEX DNA-seq Kit(左図)は広い範囲で優れたGCカバー率を示した(右図)。赤の縦線はヒトゲノムDNAのGC含量分布を示している。

内容

・Template Preparation Buffer(Red)
・Template Preparation Enzyme(Red)
・Library Synthesis Buffer(Yellow)
・Library Synthesis Enzyme(Yellow)
・Library Amplification Buffer(Green)
・Library Amplification Enzyme(Green)
・Nuclease-Free Water(Clear)
・Indexing Reagent(Blue)or Indexing Plate
Indexの配列、プレートレイアウトはこちらをご覧ください。

本キット以外に必要な機器、試薬等

  • サーマルサイクラー
  • 微量高速遠心機
  • PCRチューブまたは 96-well PCRプレートとシール
  • ピペットチップ
  • 80% (v/v) エタノール
  • Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, CAT. no. A63880)

保存

-20℃

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