1分でも早く、PCRを終わらせたい場合にお勧めです！
- ターゲット鎖長が2 kb以下なら、PCRにかかる時間がタカラバイオ酵素中で最短！
- 改変型酵素の使用で、従来の高速タイプより高い反応性を実現
- 使いやすい2×プレミックス試薬
製品説明
TaKaRa Taq HS Fast Detectは、Taq DNA polymeraseを改変することによりPCR反応速度を極限まで高めた改良型PCR酵素を採用している。PCR反応に必要なdNTP Mixtureやバッファーがあらかじめ2×濃度でプレミックス化されているため操作が簡便で、伸長時間を5 sec./kbに設定した高速PCR条件により2 kb以下のPCR増幅を迅速に行うことができる。
本酵素は5’→3’exonuclease活性および3’→5’exonuclease活性を有しない。また、抗体を用いたホットスタートPCR用の酵素であり、PCR反応前のミスプライミングやプライマーダイマーに起因する非特異的増幅を抑えることができる。この抗体は、PCRの最初の変性ステップで変性するため、特別な活性化ステップは必要ない。
本酵素は5’→3’exonuclease活性および3’→5’exonuclease活性を有しない。また、抗体を用いたホットスタートPCR用の酵素であり、PCR反応前のミスプライミングやプライマーダイマーに起因する非特異的増幅を抑えることができる。この抗体は、PCRの最初の変性ステップで変性するため、特別な活性化ステップは必要ない。
内容
| TaKaRa Taq HS Fast Detect Premix（2×） | 400 μl×5 |
保存
－20℃
起源
Escherichia coli carrying a plasmid that encodes the Thermus aquaticus DNA polymerase gene
用途
高速PCR 増幅による迅速検出
一般的なPCR反応組成（total 20 μl）
| TaKaRa Taq HS Fast Detect | 10 μl | |
| Template | ＜100 ng | |
| Primer 1 | 0.6 μM | (final conc.) |
| Primer 2 | 0.6 μM | (final conc.) |
| 滅菌精製水 | up to 20 μl |
注）反応液の室温調製も可能であるが、試薬は必ず氷上に置いて使用する。
Primer設計
PrimerはTm値が55℃より高くなるように設定する。
(Tm値は下記のTm近似計算式※で計算）
※Tm値＝4×（G,Cの数）＋2×(A,Tの数)＋35－2×（総塩基数）
(Tm値は下記のTm近似計算式※で計算）
※Tm値＝4×（G,Cの数）＋2×(A,Tの数)＋35－2×（総塩基数）
| 注） | Nearest Neighbor法を用いたTm値を利用する場合は、PrimerのTm値が60℃より高くなるように設定する。 |
PCR条件
2step PCR
3step PCR＊3
| 94℃＊1 | 5 sec. | 30～35 cycles | |
| 65℃ | 5～(10)＊2 sec./kb |
3step PCR＊3
| 94℃＊1 | 5 sec. | 30～35 cycles | |
| 55℃ | 1 sec. | ||
| 68℃ | 5～(10)＊2 sec./kb |
| *1 | 変性温度は必ず94℃に設定してください。変性温度を95℃以上に設定することは酵素の失活による反応性低下の原因になります。 |
| *2 | Ramp temperature speedが5℃以上の高速サーマルサイクラーを用いる場合、伸長時間を10 sec./kbに設定してください。 |
| *3 | Tm近似計算式で計算したTm 値が55℃以下の場合（Nearest Neighbor法で計算したTm値が60℃以下の場合）は、3 step PCRをお試しください。 |
【ご注意】
本製品は従来のベーシックPCR酵素と比べて、非常に少ない鋳型量からの増幅に対応したPCR酵素です。
そのため微生物検出を目的とした場合、反応系に混入した環境細菌由来の微量なゲノムDNAを鋳型に増幅してしまう場合があります。
その場合はPCRのサイクル数を減らす、プライマー設計を変更することをご検討ください。
本製品は従来のベーシックPCR酵素と比べて、非常に少ない鋳型量からの増幅に対応したPCR酵素です。
そのため微生物検出を目的とした場合、反応系に混入した環境細菌由来の微量なゲノムDNAを鋳型に増幅してしまう場合があります。
その場合はPCRのサイクル数を減らす、プライマー設計を変更することをご検討ください。
PCR産物について
TaKaRa Taq HS Fast Detectを用いて増幅したPCR産物のほとんどは、3’末端にAが1塩基付加されている。したがって、そのPCR産物をそのままT-Vectorにクローニングすることができる。また、末端平滑化およびリン酸化を行って、平滑末端のベクターにクローニングすることも可能である。
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