Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription and Screening System

in vitro transcriptionによるsgRNAの調製およびsgRNAの有効性の確認
  • CRISPR/Cas9ゲノム編集用のsgRNAをin vitro transcriptionで調製
  • 簡便なプロトコールで高品質sgRNAが調製可能。しかも高収量
  • 得られたsgRNAはトランスフェクション、エレクトロポレーションに使用可能
  • Screening Kitに含まれるCas9タンパク質と組み合わせることで、実サンプルを用いることなくin vitroでのsgRNAの有効性確認(Screening)が可能

 ゲノム編集ガイド
製品コード メーカー
略称
製品名 容量 価格(税別)
キャンペーン価格
特記事項 説明書、CoA
データシート
ベクター情報
参考資料 カート
Takara Code
632635

CLN

Clontech
Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit
サポートツール編 ライセンス
50回 ¥166,000
¥132,800
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
Z2635N
632636

CLN

Clontech
Guide-it™ Complete sgRNA Screening System
サポートツール編 ライセンス
50回 ¥199,000
¥159,200
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
Z2636N
632639

CLN

Clontech
Guide-it™ sgRNA Screening Kit
サポートツール編 ライセンス
50回 ¥87,000
¥69,600
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
Z2639N
632638

CLN

Clontech
Guide-it™ IVT RNA Clean-Up Kit
サポートツール編
50回 ¥81,000
¥64,800
2023/11/27~
2024/03/29

説明書・データシート・ベクター情報
Z2638N
※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。
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製品説明

Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(製品コード 632635)は、in vitro transcription反応によりsgRNAを調製するキットである。従来品のプロトコールやコンポーネントを改良することにより、簡便に高品質sgRNAを高収量で調製できる。sgRNAの精製にスピンカラム式の精製キットGuide-it IVT RNA Clean-Up Kit(製品コード 632638)を採用しており、フェノール/クロロホルムを使わずに高純度精製が行える。精製したsgRNAは、そのまま細胞へのトランスフェクションやエレクトロポレーションに使用できる。
Guide-it Complete sgRNA Screening System(製品コード 632636)は、Guide-it sgRNA In Vitro Transcription KitとCas9タンパク質を含むGuide-it sgRNA Screening Kit(製品コード 632639)から構成されている。本キットを使って調製したsgRNAと添付のCas9タンパク質を組み合わせることで、sgRNAの有効性を実サンプルを用いることなくin vitroで確認できる。事前にsgRNAの有効性を確認することで、ワークする配列を実際の変異導入実験に用いることができ、失敗リスクを軽減できる。有効性を確認するためのターゲット配列は、添付のPCR酵素を使用してPCRによって調製するが、ダイレクトPCRが可能なTerra PCR Mixを採用しているので、サンプルからゲノムDNAを抽出する手間を省くことができる。調製したターゲット配列にsgRNAとCas9タンパク質を作用させ、アガロースゲル電気泳動によって切断効率(有効性)を確認する。

図1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening Systemのフローおよびキット構成



図2. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening Systemの操作ステップの概要



図3. 他社キットとの合成sgRNAの品質比較
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitで調製したsgRNAと他社キットで調製したsgRNAを比較した。Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitで調製したsgRNAは全てシングルバンドとなっており、他社キットに比べて高品質であった。



図4. sgRNAの収量と品質
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitを用いてsgRNAを調製(反応条件:20 μl、37℃、4時間)し、NanoDrop spectrophotometerでsgRNAの収量を調べた(パネルA)。
また、Agilent Bioanalyzerを用いてsgRNAの品質を調べた(パネルB)。

内容

Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (製品コード 632635)
・Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2
Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)50 μl
Guide-it In Vitro Transcription Buffer350 μl
RNase Free Water1 ml
Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)150 μl
PrimeSTAR Max Premix (2X)625 μl
Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)100μl
•Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit(製品コード 632638)

Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit(製品コード 632638)
RNase Free Water13 ml
IVT Binding Buffer3 ml
IVT RNA Clean-Up Spin Column50個
IVT Wash Buffer6 ml×2
Collection Tubes (2 ml)50個

Guide-it Complete sgRNA Screening System (製品コード 632636)
・Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(製品コード 632635)
・Guide-it sgRNA Screening Kit(製品コード 632639)

Guide-it sgRNA Screening Kit (製品コード 632639)
Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)25 μl
15X Cas9 Reaction Buffer50 μl
15X BSA50 μl
Control sgRNA (50 ng/μl)15 μl
Control Fragment (20 ng/μl)150 μl
Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)50 μl
2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)1.25 ml
RNase Free Water
5 ml
Extraction Buffer 15 ml
Extraction Buffer 20.5 ml

保存

Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2:-20℃
Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit:室温
Guide-it sgRNA Screening Kit:-20℃

キット以外に必要な機器、試薬

・96~100%エタノール
・イソプロパノール
・NanoDrop 2000 spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific社. No. ND-2000)または同等品
注意事項
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