NucleoBond^® RNA Soil Mini

NucleoSpin Bead Tube Type Aの1 mlの目盛り線まで、土壌サンプルを加える。通常、サンプル量は250～500 mgとなる。

NucleoSpin Bead Tube Type Aに800 μlのBuffer E1を加える。
（オプション：さらにBuffer OPT 100 μlを加える。Buffer OPTの添加により無機質の多い土壌ではRNA回収量の増加が期待できるが、有機物の多い土壌では阻害物の混入が多くなる）。
さらに100 μlのフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール溶液（添加前によく混合しておく）を加えて、2秒間vortexで混合する。

Bead TubeをVortex mixer上のMN Bead Tube Holderにセットし、室温で5分間最高速度で振盪する^＊2。

最高速で（20,000×gが最適）、2分間遠心する。
上清を新しい1.5 mlチューブ（各自で用意）に移す。 抽出液のおおよその液量を計測する。

抽出液の容量に対して、1/8の液量のBuffer E2を加える。Vortexで5秒間混合する。
室温で2分間静置後、最高速度で（20,000×gが最適）、2分間遠心する。

NucleoBond RNA Mini Columnを、Buffer EQU 1.5 mlで平衡化する。
液を自然落下させてカラムを空にする。

5.の上清をカラムに入れる。
液を自然落下させてカラムを空にする。このろ液にはフェノール、クロロホルムが含まれるので、適切に処理する。

1回目の洗浄
Buffer E3　250 μlでカラムを洗浄する。

2回目の洗浄
Buffer E4　2 mlでカラムを洗浄する。

Buffer ERNA 1 mlでRNAを溶出する。
溶出液を2 ml遠心チューブ（各自で用意）に集める^＊3。

イソプロパノール 700 μl（各自で用意）を加えて、vortexで5秒間混合する。

11.の溶液600 μlをNucleoSpin RNA Column（青色リング）に加え、11,000×g、15秒間遠心する。ろ液を捨て、カラムを元のチューブに戻す。このステップを11の溶液がなくなるまで繰り返す。

Buffer E5 500 μlをNucleoSpin RNA Columnの中央に加える。 11,000×g、15秒間遠心する。 ろ液を捨て、カラムを元のチューブに戻す。このステップをもう1度繰り返す。

NucleoSpin RNA Columnを11,000×g、1分間遠心する。 ろ液を捨て、カラムを新たな1.5 mlチューブ（各自で用意）に戻す。

NucleoSpin RNA ColumnにRNase-free H₂O 50～100μl を加え、11,000×g、1分間遠心してRNAを溶出させる。