変異導入

【方法】

pUC118DNA 10 pgを鋳型に、「プライマー設計について」で例示した各変異導入（置換、欠失、挿入）用プライマーとPrimeSTAR Maxを用いてPCR（50 μl）を行った。その2 μlをE. coli JM109コンピテントセル（3×10⁸ cfu/μg pUC118）100 μlに添加し、0℃ 30分、42℃ 45秒の処理後SOC培地1 mlを加えて37℃で1時間振とう培養した。そのうち100 μlを選択プレート（LB＋Amp、IPTG、X-gal）上で培養し、白コロニー（変異体）と青コロニー（バックグラウンド）をカウントした。

【結果】

表　変異導入効率

変異のタイプ	白コロニー	青コロニー	変異導入効率
置換（3塩基）	1,948	6	99.69％
欠失（3塩基）	2,024	1	99.95％
挿入（6塩基）	1,280	2	99.84％

※ 6塩基挿入に用いたプライマーは、キットコンポーネントのControl primer FとControl primer Rに相当する。

表に示すようにpUC118 DNA 10 pgを鋳型にした場合、3種類の変異導入体（置換、欠失、挿入）が99％以上の非常に高い確率で取得できることを確認した。