TB Green^® Fast qPCR Mix

TB Green Fast qPCR Mix（製品コード RR430S/A/B）

1. 下記に示す PCR反応液を調製する。
   

   ＜1反応あたり＞

   試薬	使用量		最終濃度
   TB Green Fast qPCR Mix（2×）	10 μl		1×
   PCR Forward Primer（10 μM）	0.8 μl		0.4 μM	*1
   PCR Reverse Primer（10 μM）	0.8 μl		0.4 μM	*1
   template（＜100 ng）*2	2 μl
   滅菌精製水	6.4 μl
   total	20 μl



2. 反応を開始する。
   

   PCR反応は、下記のシャトルPCR標準プロトコールで行うことをお勧めします。
   まずはこのプロトコールを試し、必要に応じてPCR条件を至適化してください。
   Tm値が低めのプライマーなど、シャトルPCRでの反応が難しい場合には、3ステップPCRを行います。（PCR条件を至適化する場合は、「実験条件の選び方」をご参照ください。）

   
   シャトルPCR標準プロトコール
   Sample volume：20 μl
   Step1：95℃　30秒
   Stage 2：PCR反応
   　　GOTO：39（40サイクル）
   　　95℃、5秒
   　　60℃、10秒
   Stage 3：Melt Curve

   ※使用上の注意
   本製品に使用している変異型Taq HSはポリメラーゼ活性を抑制する抗Taq抗体を利用したホットスタートPCR用酵素です。他社の化学修飾タイプのホットスタートPCR酵素で必要なPCR反応前の95℃（5～）15分の活性化ステップは行わないでください。必要以上の熱処理を加えると酵素活性が低下し、増幅効率、定量精度に影響を及ぼす傾向があります。
   PCR反応前に鋳型の初期変性を行う場合でも、通常95℃ 30秒で充分です。



3. 反応終了後、増幅曲線と融解曲線を確認し、定量を行う場合は検量線を作成する。
   解析方法は、リアルタイムPCR装置の取扱説明書を参照してください。