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Application

Corystein™(Purothionin)

Application2:ホウレンソウfructose-1,6-bisphosphatase(FBPase)の活性化

反応液組成
FBPase 16 μg
wheat seed thioredoxin h1.7 nmol
E. coli thioredoxin 0.8 nmol
Chromatium thioredoxin 0.9 nmol
spinach chloroplast thioredoxin m 1.7 nmol
wheat seed purothionin(Corystein) 6 nmol
MgSO4 0.5 μmol
DTT 2.5 μmol
Tricine-KOH Buffer(pH 8.0) 50 μmol
操作手順
反応液0.5 mlを22℃で60分間インキュベートし、fructose-1,6-bisphosphate 3 μmol添加により酵素反応を開始した後、20分間反応させる。反応により生じたPiをFiske-SubbaRow法により定量する。
結果
Corystein 単独でthioredoxin(ただしwheat seed thioredoxin hは除く)より高いFBPase活性化が認められた。またE. coli thioredoxinとの併用ではCorystein単独の場合の3.6倍もの相乗効果がみられ、他のthioredoxinとの併用でもそれぞれ相乗効果が認められた(表2)。

表2 Purothionin(Corystein)およびThioredoxinによるFBPaseの活性化
TreatmentFBPase活性(遊離Piμmol/min)Thioredoxin併用
による相乗効果
(III)/[(I)+(II)]
(I)
Purothionin
(II)
Thioredoxin
(III)
Purothionin

Thioredoxin
Purothionin(Corystein)3.60   
Thioredoxin h, wheat seeds 4.7012.301.5
Thioredoxin m, spinach chloroplasts 0.405.301.3
Thioredoxin, Chromatium 0.0510.803.0
Thioredoxin, E. coli 0.3514.303.6
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