培養細胞上清中のGla 型オステオカルシンモニタリング例
Rat Gla-Osteocalcin High Sensitive EIA Kit（製品コード MK126）
4週令ラット骨髄細胞（SDラットオス由来（製品コード MK433：販売終了）)の自然分化細胞と、骨芽誘導試薬を添加し、強制分化培養を行った骨髄由来細胞の培養上清中に産生されるGla型オステオカルシン量を本キットを用いて測定を行った。タンパク質側からのモニタリングを補強する目的で、サンプリング時に培養細胞からトータルRNAの調製を行い、インターカレーター法のリアルタイムPCRによるmRNAレベルでの発現モニタリングも3種の遺伝子に対して同時に行った（ALP：アルカリホスファターゼ、Bglap2：Bone Gla Protein ＝ Osteocalcin、col1a1：I 型コラーゲンα1鎖）。
各分化ステージにサンプリングした培養上清は、ウシ胎児血清（ウシ由来オステオカルシン）含有物であったが、固相抗体がラットオステオカルシン特異的であるため、そのままダイレクトに本キットで原液測定を行うことができた。
使用試薬：TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time)
装置：Thermal Cycler Dice Real Time System
プライマー：Perfect Real Time サポートシステムのプライマーを使用（col1a1 を除く）。
各分化ステージにサンプリングした培養上清は、ウシ胎児血清（ウシ由来オステオカルシン）含有物であったが、固相抗体がラットオステオカルシン特異的であるため、そのままダイレクトに本キットで原液測定を行うことができた。
使用試薬：TB Green Premix Ex Taq II (Perfect Real Time)
装置：Thermal Cycler Dice Real Time System
プライマー：Perfect Real Time サポートシステムのプライマーを使用（col1a1 を除く）。
| 測定サンプル一覧 | Realtime Assay mRNA 相対定量値 |
EIA 培養上清 （ng/ml） |
||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| stage | Alp 1 | Bglap 2 | Col 1a1 | Rat Gla-OC | ||
| 1 | BM4W day4 | 骨髄細胞の培養 4日目 | 0.0006 | 0.007 | 0.000 | |
| 2 | BM4W OB-S1 | 骨髄細胞の培養 10日目（自然分化） | 0.009 | 0.0005 | 0.19 | 0.000 |
| 3 | BM4W OB-L1 | 骨髄細胞の培養 9日後 ＋ 骨芽誘導 7日目 | 0.012 | 0.011 | 0.044 | 0.000 |
| 4 | BM4W OB-L2 | 骨髄細胞の培養 9日後 ＋ 骨芽誘導 10日目 | 0.023 | 0.063 | 0.032 | 0.189 |
| 5 | BM4W OB-L3 | 骨髄細胞の培養 9日後 ＋ 骨芽誘導 12日目 | 0.1 | 0.4 | 0.092 | 0.692 |
| 6 | BM4W OB-L4 | 骨髄細胞の培養 3日後 ＋ 骨芽誘導 13日目 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 33.6 |
アルカリ性ホスファターゼ染色結果
 Stage 1（培養 4日目） |
 Stage 5（骨芽誘導 10日目） |
アルカリ性ホスファターゼ染色には、TRACP & ALP double-stain Kit（製品コード MK300）を使用した。
