E. coli Competent Cells について
MandelとHigaによる大腸菌における形質転換法の確立は、組換えDNA実験の重要な基礎となった。大腸菌をCaイオン存在下に置くと外来DNA（プラスミド、ファージDNA）を細胞内に取り込む“コンピテント”状態になり、この状態の細胞をコンピテントセルと称している。
組換えDNA実験では、コンピテントセルを用いた形質転換、形質導入等がよく行われるが、効率が高く再現性のよいコンピテントセルの作製は難しいとされている。遺伝子ライブラリーの作製、組換え体プラスミドの作製やサブクローニング等、特に目的とする遺伝子の含量が少ない場合では導入効率の高いコンピテントセルを用いることが重要となる。
タカラバイオでは、Hanahanの方法を改良した新しい方法により、効率の高い8種類のCompetent Cells E. coli HST08 Premium、HST02、HST04 dam－/dcm－、JM109、DH5α、HB101、CJ236、MV1184（これらは全てEK1系の宿主大腸菌である）を調製している。
製品説明
アンバー変異選択用およびssDNA調製用宿主E. coli MV1184
E. coli MV1184は、amber suppressor free株で、アンバー変異DNAの選択に利用する。あるいは、Mutan-Super Express Km（製品コード RR022）を用いて変異導入を行う際に、変異導入されたDNAをセレクションするために用いる。また、F'プラスミドを有するためM13ファージベクターやファージミドベクターの宿主としてssDNAの調製にも利用できる。
内容
| E. coli MV1184 Competent Cells | 100 μl×10本 |
| pUC119 DNA (0.1 ng/μl) | 10 μl |
| SOC Medium* | 1 ml×10本 |
* SOC Mediumの組成 ：
| 2％ | | Tryptone |
| 0.5％ | Yeast extract |
| 10 mM | NaCl |
| 2.5 mM | KCl |
| 10 mM | MgSO4 |
| 10 mM | MgCl2 |
| 20 mM | Glucose |
【ご注意】
SOC Mediumを溶かした際に、稀に沈殿が生じる場合がありますが、品質には全く問題ありません。
沈殿が生じた場合は、室温で混ぜるかもしくは37℃で数分間温めて沈殿を溶かしてご使用ください。
保存
－80℃
E. coli MV1184 Genotype
ara, Δ(
lac-proAB）,
rpsL,
thi, (
Φ80
lacZΔM15), Δ(
srl-
recA) 306：：
Tn10 (
tetr) /F'[
traD36,
proAB＋,
lac I q,
lacZΔM15]
Cell density
1～2×109 bacteria/ml
品質
1）形質転換効率
プラスミドベクターで形質転換する場合の方法により1 ng のpUC119プラスミドで形質転換し、Amp＋のプレートでコロニーを選別した。
このとき、＞ 1×107 colonies/μg・pUC119プラスミドの効率を得た。
2）F'プラスミドの安定性
pUC119DNAを用いて形質転換を行い、100 μg/mlのアンピシリン、0.3 mM IPTG、60 μg/ml X-Galを含むL-寒天培地にプレートした場合、白色のコロニーの出現率は1％以下である。
プラスミドスクリーニングに使用する抗生物質と選択濃度
| 抗生物質 | アンピシリン | カナマイシン | クロラムフェニコール | ストレプトマイシン | テトラサイクリン |
|---|
| 濃度（μg/ml） | 100 | 50 | 20 | NA | NA |
|---|
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