Low Input Library Prep Kitはイルミナ社の次世代シーケンサーにすぐに使用できるライブラリーを作製するキットであり、微量なdsDNAから高感度かつ短時間（2時間）にライブラリーを構築することができる。精製ステップが無く、バーコード付加したライブラリー作製を1チューブで行うことができ、3ステップのプロトコールはわずか2時間で完了する。本キットは50 pg～20 ngのdsDNAから効率的なライゲーションによりライブラリーを構築できるため、SMART-Seq v4またはSMARTer Universal Low Kitから得たdsDNAからIlluminaシーケンス用ライブラリーを作製するのに最適である。
Low Input Library Prep Kit v2には12種類のインデックスが含まれている。8塩基のインデックスを採用しており最初の6塩基はイルミナ社Truseq LTと同じ配列である。また、リアクションボリュームを50 μlまで減らしている（従来品は75 μl）。Low Input Library Prep Kit HTは、96ウェルマイクロプレートにインデックスが分注済みとなっている。インデックスは8塩基のイルミナ社Truseq HT i5とi7を組み合わせている。

• イルミナ社次世代シーケンサー用のsingleplexまたはmultiplex用ライブラリーの作製
• シングルリードおよびペアエンドシーケンスに対応
• 1反応あたり20 ng以上のDNAの使用や、一本鎖DNAおよびRNAを用いたライブラリー作製には適さない。

図1．プロトコールフロー
Low Input Library Prep Kitの操作は約2時間で完了する。Rsa I-消化済みSMARTer cDNA（SMARTer Universal Low RNA Kit for Illumina Sequencing）またはCovarisなどにより剪断済みのSMARTer cDNA（SMART-Seq v4）を用いてライブラリー構築を行う。

Low Input Library Prep Kit（製品コード 634947）、Low Input Library Prep Kit v2（製品コード 634899）
Template Preparation Buffer
Template Preparation Enzyme
Library Synthesis Buffer
Library Synthesis Enzyme
Library Amplification Buffer
Library Amplification Enzyme
Nuclease-Free Water
Indexing Reagent 1
Indexing Reagent 2
Indexing Reagent 3
Indexing Reagent 4
Indexing Reagent 5
Indexing Reagent 6
Indexing Reagent 7
Indexing Reagent 8
Indexing Reagent 9
Indexing Reagent 10
Indexing Reagent 11
Indexing Reagent 12

－20℃

下記の製品は本プロトコールにて使用できることが確認されています。他製品で代替はできませんので、ご注意ください。

• シングルチャンネルピペット 10 μl、20 μlおよび200 μl 各1本
• 8連チャンネルピペット 20 μl、200 μl 各1本
• フィルターピペットチップ 10 μl、20 μlおよび200 μl 各1箱
• キャップ付き8-strip nuclease-free 0.2 ml thin wall PCR チューブ

SPRI Bead 精製

• Agencourt AMPure PCR Purification Kit
  （5 ml, Beckman Coulter社 Code. A63880 ; 60 ml, Beckman Coulter社 Code. A63881）
• Magnetic Stand-96（Ambion社 Code. AM10027）
• 96-well V-bottom Plate（500 μl）（VWR（Axygen）社 Code. 47743-996）
• MicroAmp Clean Adhesive Seal（Applied Biosystems社 Code. 4306311）
• 80％ Ethanol
• Purification Buffer またはElution Buffer（下記の製品に含まれる）
SMARTer Universal Low Input RNA Kit for Sequencing（製品コード 634938/634940）
SMARTer Ultra Low RNA Kit for Illumina Sequencing（製品コード 634936)
SMARTer Ultra Low Input RNA for Illumina Sequencing - HV（製品コード 634820/634823/634826/634828/634830）
SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing（製品コード 634888/634889/634890/634891/634892/634893/634894）