Low Input Library Prep Kitはイルミナ社の次世代シーケンサーにすぐに使用できるライブラリーを作製するキットであり、微量なdsDNAから高感度かつ短時間（2時間）にライブラリーを構築することができる。精製ステップが無く、バーコード付加したライブラリー作製を1チューブで行うことができ、3ステップのプロトコールはわずか2時間で完了する。本キットは50 pg～20 ngのdsDNAから効率的なライゲーションによりライブラリーを構築できるため、SMART-Seq v4またはSMARTer Universal Low Kitから得たdsDNAからIlluminaシーケンス用ライブラリーを作製するのに最適である。

• イルミナ社次世代シーケンサー用のsingleplexまたはmultiplex用ライブラリーの作製
• シングルリードおよびペアエンドシーケンスに対応
• 1反応あたり20 ng以上のDNAの使用や、一本鎖DNAおよびRNAを用いたライブラリー作製には適さない。

図1．プロトコールフロー
Low Input Library Prep Kitの操作は約2時間で完了する。Rsa I-消化済みSMARTer cDNA（SMARTer Universal Low RNA Kit for Illumina Sequencing）またはCovarisなどにより剪断済みのSMARTer cDNA（SMART-Seq v4）を用いてライブラリー構築を行う。

Low Input Library Prep Kit（製品コード 634947）
Template Preparation Buffer
Template Preparation Enzyme
Library Synthesis Buffer
Library Synthesis Enzyme
Library Amplification Buffer
Library Amplification Enzyme
Nuclease-Free Water
Indexing Reagent 1
Indexing Reagent 2
Indexing Reagent 3
Indexing Reagent 4
Indexing Reagent 5
Indexing Reagent 6
Indexing Reagent 7
Indexing Reagent 8
Indexing Reagent 9
Indexing Reagent 10
Indexing Reagent 11
Indexing Reagent 12

－20℃

下記の製品は本プロトコールにて使用できることが確認されています。他製品で代替はできませんので、ご注意ください。

• シングルチャンネルピペット 10 μl、20 μlおよび200 μl 各1本
• 8連チャンネルピペット 20 μl、200 μl 各1本
• フィルターピペットチップ 10 μl、20 μlおよび200 μl 各1箱
• キャップ付き8-strip nuclease-free 0.2 ml thin wall PCR チューブ

SPRI Bead 精製

• Agencourt AMPure PCR Purification Kit
  （5 ml, Beckman Coulter社 Code. A63880 ; 60 ml, Beckman Coulter社 Code. A63881）
• Magnetic Stand-96（Ambion社 Code. AM10027）
• 96-well V-bottom Plate（500 μl）（VWR（Axygen）社 Code. 47743-996）
• MicroAmp Clean Adhesive Seal（Applied Biosystems社 Code. 4306311）
• 80％ Ethanol
• Purification Buffer またはElution Buffer（下記の製品に含まれる）
SMARTer Universal Low Input RNA Kit for Sequencing（製品コード 634938/634940）
SMARTer Ultra Low RNA Kit for Illumina Sequencing（製品コード 634936)
SMARTer Ultra Low Input RNA for Illumina Sequencing - HV（製品コード 634820/634823/634826/634828/634830）
SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing（製品コード 634888/634889/634890/634891/634892/634893/634894）