QUICK-Clone cDNAは、遺伝子特異的プライマーを用いて目的遺伝子を増幅することが可能な二本鎖cDNA製品である。単離済みのcDNAや構造上関連があるcDNA、生物種間で相同のcDNAを増幅する場合に理想的である。目的のcDNAを直ちに増幅することが可能であり、従来のライブラリー構築やスクリーニングは不要である。QUICK-Clone cDNAは遺伝子特異的プライマーや縮重プライマーを用いたハイブリダイゼーションプローブの作製にも使用することができる(1~5)。
PCR増幅法で良好な結果を得るには、質の高いcDNA鋳型が必要である。QUICK-Clone cDNAは高品質なPremium Poly A+ RNAを材料にオリゴdTプライマーを用いて合成を行い、精製で残存RNAを除いた後、400 bp未満のcDNA断片を除去している。その結果、非常に高純度の二本鎖cDNAが得られ、本製品はそのままPCRに使用することが可能である。
QUICK-Clone cDNAの各製品には、cDNAを10 ngずつ分注したチューブが2本含まれている。これは最終液量50 μlのPCR約20回分に相当する。
通常のPCR反応にはTitanium Taq DNA Polymerase、目的遺伝子のサイズが大きい場合にはAdvantage 2 Polymerase Mixの使用をお勧めする。
全長ヒトcDNAを入手可能
QUICK-Clone II Human Universal cDNA(製品コード 637260)は、正常ヒト組織に由来する30種類を超えるQUICK-Clone cDNAを混合して最大限に利用した製品である(正確な数は組織の入手状況により変化することがある)。本製品は、ヒト遺伝子の大部分を含み、全長cDNAを増幅するために特別に調製されている。
注意
・cDNAの由来材料はロットにより異なります。各製品の由来については、製品に添付の品質保証書(Certificate of Analysis)をご覧いただくか、テクニカルサポートにお問い合わせください。
・QUICK-Clone XG Tumor cDNAはヌードマウス可移植性ヒト腫瘍由来の製品です。
図1. ヒトTFR mRNA全コード領域のPCR増幅
Human Heart QUICK-Clone cDNA(#637213)をPCRで増幅した後に制限酵素で消化し、ヒトTFR遺伝子の全コード領域が増幅されていることを確認した。
レーン1:制限酵素無添加
レーン2:Hind III消化
レーン3:Hpa I消化
レーンM1:λHind III DNAサイズマーカー
レーンM2:φX174/Hae III DNAサイズマーカー
表1. QUICK-Clone II Human Universal cDNAの組織サンプル
Adrenal Gland Aorta Bone Marrow Brain Brain, cerebellum Brain, cerebral cortex Brain, hippocampus Brain, thalamus Fat Cell Fetal Brain Fetal Heart Fetal Kidney Fetal Liver Fetal Lung Heart Kidney Leukocyte Liver |
Lung Lymph Node Mammary Gland Ovary Pancreas Pituitary Gland
Placenta Prostate Retina Salivary Gland Skeletal Muscle Small Intestine Spinal Cord SpleenStomach Testis Thymus Thyroid Gland Uterus |
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