制限酵素の高品質保証
制限酵素を使用するうえで重要な純度検定であるLigation-Recutting TestにおけるLigation-Recutting効率品質規格を一覧表にまとめた。タカラバイオの制限酵素は、この規格により高い品質を保証している。
Ligation-Recutting Test対象の基質DNAに対して、まず、2～50倍過剰の酵素を作用させる。
切断されたDNAを回収し、5'末端濃度が0.1～1.0 μMになるようにT4 DNA Ligase Buffer［66 mM Tris-HCl（pH7.6）、6.6 mM MgCl2、10 mM DTT、0.4 mM ATP］に溶解させる。適当量のT4 DNA Ligaseを加え、16℃で1時間あるいは16～18時間反応させる。DNA回収後、制限酵素反応液に溶解させ、同じ制限酵素でDNAを再切断する。以上の結果により、ligase inhibitor、phosphatase、exonucleaseの有無を判定している。
切断されたDNAを回収し、5'末端濃度が0.1～1.0 μMになるようにT4 DNA Ligase Buffer［66 mM Tris-HCl（pH7.6）、6.6 mM MgCl2、10 mM DTT、0.4 mM ATP］に溶解させる。適当量のT4 DNA Ligaseを加え、16℃で1時間あるいは16～18時間反応させる。DNA回収後、制限酵素反応液に溶解させ、同じ制限酵素でDNAを再切断する。以上の結果により、ligase inhibitor、phosphatase、exonucleaseの有無を判定している。
| 制限酵素 | ライゲー ション 効率(％) |
再切断 効率 (％) |
| Aat II | >90 | >95 |
| Acc I | >90 | 100 |
| Acc II | >90 | 100 |
| Acc III | >95 | 100 |
| Afa I | 90 | 100 |
| Afl II | >95 | 100 |
| Alu I | >95 | 100 |
| Aor13H I | >95 | 100 |
| Aor51H I | 90 | 95 |
| Apa I | >95 | 100 |
| ApaL I | >95 | 100 |
| Bal I | >90 | 100 |
| BamH I | >95 | 100 |
| Ban II | 100 | 100 |
| BciT130 I | 90 | 90 |
| Bcn I ＊ | 90 | 90 |
| Bgl I | >95 | 100 |
| Bgl II | >95 | 100 |
| Bln I | 90 | 100 |
| BmeT110 I | >90 | 100 |
| Bpu1102 I | 90 | 100 |
| BspT104 I | >95 | 100 |
| BspT107 I | >95 | 100 |
| 制限酵素 | ライゲー ション 効率(％) |
再切断 効率 (％) |
| Bsp1286 I | 90 | 100 |
| Bsp1407 I | 90 | 100 |
| BssH II | 90 | 100 |
| BstP I | >95 | 100 |
| BstX I | >90 | 100 |
| Cfr10 I | 90 | 100 |
| Cla I | >95 | 100 |
| Cpo I | 100 | 100 |
| Dde I | >95 | >95 |
| Dra I | >90 | 100 |
| Dpn I | >70 | >90 |
| Eae I | 100 | 100 |
| EcoO65 I | 95 | 100 |
| EcoO109 I | >95 | 100 |
| EcoR I | 100 | 100 |
| EcoR V | 90 | 100 |
| EcoT14 I | 100 | 100 |
| EcoT22 I | 90 | 100 |
| Eco52 I | 90 | 100 |
| Eco81 I ＊ | 90 | 90 |
| Fba I | 100 | 100 |
| Fok I | >95 | 100 |
| Hae II | >95 | 100 |
| 制限酵素 | ライゲー ション 効率(％) |
再切断 効率 (％) |
| Hae III | >95 | 100 |
| Hap II | >90 | 100 |
| Hha I | >90 | 100 |
| Hinc II | >95 | 100 |
| Hind III | 100 | 100 |
| Hinf I | >90 | 100 |
| Hpa I | >95 | 100 |
| Kpn I | >90 | >95 |
| Mbo I | 95 | 100 |
| Mbo II | 90 | 100 |
| Mfl I | >95 | >95 |
| Mlu I | 100 | 100 |
| Msp I | 90 | 100 |
| Mun I | 90 | 100 |
| Nae I | 90 | >95 |
| Nco I | >95 | 100 |
| Nde I | 90 | 100 |
| Nhe I | 90 | 95 |
| Not I | >95 | 100 |
| Nru I | 95 | 95 |
| PmaCI | 95 | 100 |
| Psp1406 I | 90 | 100 |
| Pst I | >95 | 100 |
| 制限酵素 | ライゲー ション 効率(％) |
再切断 効率 (％) |
| Pvu I | >95 | 100 |
| Pvu II | >95 | 100 |
| RspRS II | >95 | >95 |
| Sac I | >99 | 100 |
| Sac II | >90 | 95 |
| Sal I | >95 | 100 |
| Sau3A I | >95 | 100 |
| Sca I | >95 | 100 |
| Sfi I | 90 | 100 |
| Sma I | >95 | 100 |
| Smi I | >80 | >90 |
| SnaB I | 90 | >95 |
| Spe I | >99 | 100 |
| Sph I | 100 | 100 |
| Sse8387 I | 100 | 100 |
| Ssp I | 90 | 100 |
| Stu I | >95 | 100 |
| Taq I | >90 | >90 |
| Van91 I | 90 | 100 |
| VpaK11B I | >90 | 100 |
| Xba I | 100 | 100 |
| Xho I | >95 | 100 |
| Xsp I | >90 | 100 |
* ライゲーション反応にはTaKaRa DNA Ligation Kit Ver.2を使用し、26℃で10分間反応させる。
- 注意事項
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