簡単・迅速、生体液サンプルからの細胞外小胞(EV)精製キット

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit

  • 最大850 μlの生体液サンプルや細胞培養上清から高純度に濃縮された細胞外小胞を30分以内に分離
  • カルネキシンやアルブミンなど非エキソソームタンパク質の混入がなく、エキソソーム陽性マーカーを発現している細胞外小胞を取得
  • RT-qPCRやNGS解析に十分な量の細胞外小胞を回収可能
  • 精製された細胞外小胞は、透過型電子顕微鏡(TEM)によって典型的な形態を示す
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 635741 Z5741N Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit(Mini)
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20回 ¥85,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)は、少量の生体液サンプルや細胞培養上清からエキソソームなどの細胞外小胞を簡便、迅速に分離するキットである。抗体を用いず、レクチンベースの結合物質を用いて特別にデザインされたCapturemスピンカラムの使用により、血漿、唾液、脳脊髄液(CSF)などの生体液サンプルから30分以内に高純度に濃縮された細胞外小胞を単離することができる。カラムあたり最大で1010個の細胞外小胞が回収でき、プロテオーム解析、ゲノム解析、トランスクリプトーム解析に十分な量を得ることが可能である。キットには、予備精製カラム、Capturemスピンカラム、平衡化バッファー、洗浄バッファー、溶出バッファーが含まれている。
図1.Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)の迅速ワークフロー

サンプルをPre-Clearing Columnでろ過後、平衡化済みのCapturem Mini Spin Columnに細胞外小胞を結合させ、Wash Bufferで洗浄後、Elution Bufferで溶出する。各ステップの遠心操作は500×g、1~2分で、30分以内に全操作が完了する。

図2.回収された細胞外小胞のサイズ分布の比較

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit(Mini)または超遠心分離によって、500 μlの血漿からN=3で細胞外小胞を分離し、ナノ粒子トラッキング解析(NTA)を行った。サイズ分布の平均を黒線、標準誤差を赤線で示した。Capturemは超遠心分離よりサイズ分布の範囲が狭く、一般的な細胞外小胞体のサイズ範囲内となっており、より高純度に分離されていることが示された。

図3.様々なサンプルからの細胞外小胞の抽出例

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)を用いて母乳、唾液、脳脊髄液(CSF)、血清、尿、細胞培養上清から細胞外小胞を分離し、ナノ粒子トラッキング解析(NTA)を行った。サイズ分布の平均を黒線、標準誤差を赤線で示した。全てのサンプルから細胞外小胞が分離できており、Capturemの有用性が示された。

図4.エキソソームマーカーおよび非エキソソームタンパク質の検出

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit(Mini)または超遠心分離(UC)によって血漿から細胞外小胞を分離し、ウェスタンブロッティングでエキソソームの陽性マーカーであるCD63、CD9、Alix、および非エキソソームタンパク質であるカルネキシン、アルブミンを検出した。CapturemではCD63、CD9、Alixがよく検出されており、カルネキシンおよびアルブミンの混入レベルは低いことが示された。

図5.RNA収量の比較

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Kit(Mini)は50 μlの血漿から、超遠心分離は300 μlの血漿からそれぞれ細胞外小胞を分離した。NucleoSpin miRNA PlasmaでmiRNAを精製し、BioanalyzerでRNA収量を調べた(25 ntのピークは内部標準)。いずれもRNA濃度は約100 pg/μlで、Capturemの方が少ないサンプル量で同等の収量が得られた。

内容

Capturem Extracellular Vesicle Isolation Mini Spin Columns20個
Extracellular Vesicle Isolation Pre-Clearing Columns20個
Extracellular Vesicle Isolation Equilibration Buffer20 ml
Extracellular Vesicle Isolation Wash Buffer20 ml
Extracellular Vesicle Isolation Elution Buffer4 ml

保存

室温

本製品以外に必要なもの

・2 ml Tube カラム1本あたり3本(3,000×gの遠心が可能なもの)
・PBS without CaCl2 or MgCl2

用途

・次世代シーケンス
・リアルタイムPCR
・プロテオミクス解析

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