Calpastatin

Calpastatinはカルパイン（カルシウム依存性システインプロテアーゼ）に特異的に作用する内在性のプロテアーゼインヒビターであり、120から140アミノ酸残基よりなる4つの繰り返し配列とN末端側の相同性のない配列からなっている。高等動物の種々の細胞に広く分布している^1,2）。
本製品はヒトCalpastatinのドメインIを遺伝子組換え技術により生産し、高度に精製したもので、分子量約14,000、135アミノ酸残基よりなる^1,3）。

－20℃

凍結乾燥品（白色無定形粉末）
滅菌精製水に溶解後使用する｡

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

カゼインを基質とした時のCalpain活性に対する阻害を、以下の方法により測定する。

使用する試薬
A：1 mg/ml Calpain
B：2% Casein
C：6 mg/ml Cysteine
D：0.03～0.05 mg/ml^* Calpastatin
E：50 mM CaCl₂
F：5% TCA

操作手順
1．A液1.5 μl、B液40 μl、C液20 μl、D液10 μlを混合し、37℃で5分間放置する。
2．E液20 μlを添加し、さらに37℃で20分間放置後、F液200 μlを添加し、反応を停止させる。
3．遠心分離した上清の280 nmの吸光度を測定する。
4．ブランクテストは、D液の代わりにH₂Oを10 μl（Blank 1）、D液、E液の代わりにH₂Oを30 μl（Blank 2）添加し、上記と同じ操作で反応し、280 nmの吸光度を測定する。
計算式
阻害活性（μg Calpain inhibited/μg Calpastatin）＝ ［ΔA _280･Blank － ΔA _280･Test^*］/［ΔA _280･Blank］×［Calpain（μg）］/［Calpastatin（μg）］
ΔA_280･Blank ＝ A_{280･Blank 1} － A_{280･Blank 2}
ΔA _280･Test^* ＝ A _280･Test － A_{280･Blank 2}
*ΔA _280･Testが0.1～0.3の間になるようにCalpastatin濃度を設定する。