赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 (EIEC) (invE gene) One Shot PCR Kit

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製品コード TaKaRa
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参考
資料
TKR RR117A RR117A 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌 (EIEC) (invE gene) One Shot PCR Kit
48回 ¥62,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

本製品は赤痢菌および腸管侵入性大腸菌(EIEC)の病原遺伝子であるinvE遺伝子をコードする配列領域をターゲットとし、PCR法で簡便かつ迅速に検出を行うためのOne Shot PCR Kitである。
本製品では、PCRに必要な試薬すべてが0.2 ml PCR tubeに分注されており、サンプルを添加するだけでPCR反応を開始することができる。また、DNAポリメラーゼに従来のTaqより増幅効率の優れたTaKaRa Ex Taq HSを採用しており、より短時間で高感度の検出が可能になった。さらに、反応阻害などによる偽陰性判定を防ぐためのインターナルコントロールDNAが含まれている。このインターナルコントロールDNA由来の増幅産物は、invE遺伝子由来の増幅産物とサイズが大きく異なるので、電気泳動による判定を確実に行うことができる。

[注意]本製品では、ブタ赤痢菌は検出できない。

内容

(48回分、50 μl反応系)
2×One Shot PCR solution tube(無色の0.2 ml PCR tube)   25 μl×48本


【 2×One Shot PCR solutionに含有されているもの 】
  • Primer Set INV-1 & 2
    【標的遺伝子】赤痢菌および腸管侵入性大腸菌病原因子invE遺伝子を増幅検出する。
    赤痢菌および腸管侵入性大腸菌病原因子のなかで、ipaH遺伝子はゲノムあるいはプラスミドのいずれかに存在するといわれており、ほとんどの赤痢菌株はこの遺伝子が陽性である。invE遺伝子はプラスミド上にある侵入性遺伝子のため、脱落する場合がある。ipaH遺伝子陽性株のうち、約50%がinvE遺伝子陽性株といわれている。
    【増幅サイズ】293 bp


  • インターナルコントロールDNA
    【増幅サイズ】691 bp
    ターゲット遺伝子とは異なる配列を有するDNA分子で、偽陰性の判定を目的としている。すべての反応系に存在させることで、ターゲットが不検出の場合、インターナルコントロールDNAの検出ができていれば、PCR反応阻害が起こらず検出限界以下と判定できる。また、ターゲット、インターナルコントロールDNAのどちらも不検出である場合、PCR反応が正常に進まなかったことがわかる。なお、ターゲットのDNA量が多い場合、そのターゲットの増幅反応が優先され、インターナルコントロールDNAの検出ができないことがある。この場合、ターゲット遺伝子が正しく検出されていれば、陽性であると判定できる。単品販売している特殊細菌検出用Positive Contorl Template SS(製品コード S038)を用いた場合と同じサイズの増幅産物が得られる。
  • TaKaRa Ex Taq HS
    TaKaRa Ex Taq HSは、抗Taq抗体とTaKaRa Ex Taqを混合したもので、ホットスタートPCR用の酵素である。高温に加熱するまでは抗Taq抗体が酵素に結合し、ポリメラーゼ活性を抑えているため、サイクル前のミスプライミングやプライマーダイマーに由来する非特異的増幅を防ぐことができる。
  • Ex Taq Buffer
  • dNTP Mixture

保存

-20℃
各チューブには、TaKaRa Ex Taq HSが含まれていますので、激しい攪拌操作は避けてください。また凍結融解により反応性が低下する場合がありますので使用するチューブの試薬のみ融解してください。

キット以外に必要な試薬、機器

本キットを用いた検出過程では、さらに次のような試薬、機器を必要とする。
【試薬】
  1. 滅菌水
  2. アガロースゲル
    PrimeGel Agarose PCR-Sieve(製品コード 5810A)
  3. 電気泳動用 buffer
    Tris-Acetate-EDTA Buffer (TAE) 50x Powder, pH8.3(製品コード T9131)
    またはTBE (Tris-borate-EDTA) powder(製品コード T905)
  4. DNA マーカー
    100 bp DNA ladder(製品コード 3407A/B)
  5. Loading buffer(6× : 36% glycerol, 0.05% bromophenol blue, 0.05% xylene cyanol, 30 mM EDTA)(4. に記載のDNAマーカーには添付されている。)
  6. DNA 染色剤
    SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain(製品コード 5760A/5761A)
    またはエチジウムブロマイド
【機器】
  1. ヒートブロック(95℃まで温度を上げられるもの)
  2. 1.5 mlチューブ対応型冷却遠心機
  3. サーマルサイクラー
    TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Touch(製品コード TP350)
    TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient/Standard(製品コード TP600/TP650)
  4. 電気泳動装置
    Mupid-2plus(製品コード M-2P)
    Mupid-exU(製品コード EXU-1)
  5. 電気泳動ゲル撮影装置(SYBR Green Iを用いる場合は、専用のフィルターが必要です。)
【その他】
  1. 1.5 mlチューブまたは0.2 ml PCR tube
    0.2 ml Hi-Tube Dome Cap(製品コード NJ200/NJ201)など
  2. 200 μl & 20 μlマイクロピペット
  3. マイクロピペット用チップ
  4. アガロースゲル染色用トレイ(SYBR Green Iを用いる場合はポリプロピレン製容器を使用してください。)

  遺伝子検出・検査 関連試薬の選択フローをご利用ください

分野別の試薬選択フロー
手法別の試薬選択フロー

「検査(PCR/ELISA)」関連のお役立ち情報専用ページもご参照ください。

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