シグナル伝達経路プロファイリングシステム

  • シス作用性エンハンサーエレメントの活性化をin vivoで研究
  • 非常に広範囲のシグナル伝達経路をカバー
  • 簡便な操作方法&高い信頼性
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 631910 Z1910N Pathway Profiling SEAP System
1 Set ¥145,200
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631901 Z1901N pSRE-SEAP Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631903 Z1903N pAP1-SEAP Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631906 Z1906N pAP1(PMA)-TA-Luc Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631907 Z1907N pAP1(PMA)-SEAP Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631908 Z1908N pTAL-SEAP Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631909 Z1909N pTAL-Luc Vector
20 μg ¥90,600
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631704 Z1704N Great EscAPe™ SEAP Fluorescence Detection Kit
300回 ¥105,100
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631736 Z1736N Great EscAPe™ SEAP Chemiluminescence Kit 2.0
50回 ¥45,300
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631737 Z1737N Great EscAPe™ SEAP Chemiluminescence Kit 2.0
300回 ¥93,700
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631738 Z1738N Great EscAPe™ SEAP Chemiluminescence Kit 2.0
1,000回 ¥170,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 631927 Z1927N Kinase Expression Vector Set
  • 取寄
1 Set ¥126,700
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製品説明

Pathway Profiling Systemは、シグナル伝達経路の活性化をin vivoで評価する手段を提供する。本システムはレポーター遺伝子の上流にそれぞれ異なるシスエレメントを組み込んだベクター(図1)をセットにしたものである。ベクターのいくつかは個別にも販売している。1回のトランスフェクション実験で、外部から与えた刺激、薬剤または遺伝子産物によって影響を受ける転写因子のプロファイルを取得することが可能である。
レポーターベクター(Pathway Profiling Vector)にはルシフェラーゼまたはSEAP(分泌型アルカリホスファターゼ)がレポーターとして組込まれている。ルシフェラーゼ活性は、細胞ライセートを用いた通常のアッセイ法で測定可能である。SEAPは単に培養上清をサンプリングするだけで測定を行える。ClontechではSEAP活性の測定用のGreat EscAPe SEAP Detection Kitを用意している。
Pathway Profiling SEAPおよびPathway Profiling Luciferase Systemは広範なシグナル分析に使用できる(表1)。

図1. Pathway Profiling Vectors
ベクターには2種類のプロモーター(チミジンキナーゼ・プロモーター(TAL)由来のTATA様領域全体と、そのTATAボックス(TA)のみ)のどちらか一方が組み込まれている。
表1. Pathway Profiling Systems Applications
  SEAP Systems Luciferase System
DNA結合コンセンサスサイト シグナル伝達経路 1
(#631910)
2
(#631920)
(販売終了)
2
(#631912)
(販売終了)
3
(#631913)
(販売終了)
4
(#631914)
(販売終了)
研究分野   汎用/
ストレス
核ホルモン
受容体
PKC/Ca2+
シグナリング
細胞増殖、細胞周期分化
AP1 JNK      
AP1(PMA) PKC        
CRE PKA/CREB      
E2F cell cycle progression      
ERE estrogen receptor        
GRE glucocorticoid receptor        
GAS JAK/STAT          
HSE HSF        
ISRE JAK/STAT        
Myc cell cycle      
NFAT Ca2+/NFAT      
NFκB IKK/NFκB      
p53 cell growth/apoptosis        
RARE retinoic acid receptor        
Rb cell cycle progression        
SRE MAPK/ERK      
STAT3 JAK/STAT          
TRE thyroid receptor        
※各システムには適切なネガティブコントロールベクターを添付しています。これらのベクターはエンハンサー配列のクローニングにも使用できます。


図2. Luciferase System 2が外部刺激に対して示す特異的な応答
HEK 293細胞にSystem 2 Vectorをトランスフェクトした。トランスフェクションの24時間後、細胞に10 ng/mlのPMAまたは10 ng/mgのPMAとさらに1 μMのイオノマイシン(ionomycin)を加え、6時間処理した。処理後、細胞を回収し、ルシフェラーゼ活性を測定した。PMA(PKC活性化因子)とイオノマイシン(細胞内カルシウム濃度の上昇を引起す)の処理により、pNFAT-TA-Lucでは50倍、pAP-1-TA-Lucでは30倍、pNFκB-TA-Lucでは3倍の誘導が生じている。pTA-Luc Vectorはエンハンサーエレメントを含まないネガティブコントロールである。
RLU=相対発光強度

内容

Pathway Profiling SEAP System
(製品コード 631910)
・20 μg pTAL-SEAP Vector (0.5 μg/μl; negative control)
・20 μg pSEAP2-Control Vector (0.5 μg/μl; positive control)
・20 μg pAP1-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pSRE-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pGRE-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pNFκB-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pNFAT-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pCRE-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pMyc-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・20 μg pHSE-SEAP Vector (0.5 μg/μl)
・1 ml 2 M Calcium Solution
・7 ml 2× HEPES-Buffered Saline (HBS)
・7 ml Sterile H2O

Kinase Expression Vector Set
(製品コード 631927)
・20 μg pCMV-MEK1 Vector
・20 μg pCMV-MEKK1 Vector
・20 μg pCMV-PKA Vector

保存

Transfection Reagents, Vectors:-20℃
その他のコンポーネント:4℃

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注意事項
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