プラスミドDNA用いるゲノム編集システム

CRISPR/Cas9 プラスミド システム

  • 1つのベクターでsgRNA、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質を同時に発現
  • 準備するのはsgRNA発現用オリゴDNAだけ
  • 線状化ベクターと高効率なLigation Mix、コンピテントセルが含まれており、sgRNA配列を迅速、確実にクローニング
  • 輝度の高い蛍光マーカー(ZsGreen1、tdTomato)の利用により、導入効率のモニタリングやFACSによる細胞の濃縮、単離が可能
メーカー
略称
製品コード TaKaRa
Code
製品名 容量 価格(税別) 特記事項 説明書
データシート
ベクター情報
参考
資料
CLN 632601 Z2601N Guide-it™ CRISPR/Cas9 System (Green)
  • ライセンス
1 Kit ¥73,000
説明書・データシート・ベクター情報
CLN 632602 Z2602N Guide-it™ CRISPR/Cas9 System (Red)
  • ライセンス
1 Kit ¥73,000
説明書・データシート・ベクター情報

製品説明

Guide-it CRISPR/Cas9 Systemは、CRISPR/Cas9ゲノム編集に使用するsingle guide RNA (sgRNA)配列をプラスミドベクターにクローニングし、哺乳類細胞で発現させるためのキットである。本製品に含まれるpGuide-itプラスミドベクターには、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質(ZsGreen1、またはtdTomato)が搭載されており、クローニングしたsgRNAと同時に、Cas9ヌクレアーゼ、蛍光タンパク質を発現させることができる。蛍光マーカーとして、輝度の高いZsGreen1、tdTomatoを利用しているため、トランスフェクション効率のモニタリングやフローサイトメトリーによる導入細胞の濃縮、単離に用いることができる。sgRNA発現プラスミドの構築は非常にシンプルで、準備するのはターゲット配列に対応して設計した1組のオリゴDNAだけである。製品には線状化済みのベクター、高効率のLigation mix、高効率のStellar Competent Cellが含まれており、準備したオリゴDNAをアニーリング後、簡単に効率良くベクターにライゲーションし、形質転換することができる。
本製品には、10回のsgRNA発現プラスミド構築に必要な試薬が全て含まれている。
pGuide-itプラスミドベクターの構造
図1 pGuide-itプラスミドベクターの構造

pGuide-it-ZsGreen1 plasmidを用いたゲノム編集
図2 pGuide-it-ZsGreen1 plasmidを用いたゲノム編集
12-wellプレートにHEK293細胞、HeLa細胞、U2OS細胞、HT1080細胞、各1×105 cellsを播種し16時間培養した後、Xfect Transfection Reagentを用いてpGuide-it-ZsGreen1 plasmidのトランスフェクションを行った。pGuide-it-ZsGreen1 plasmidは、CCR5、C4BPB、EMX1を標的遺伝子とするsgRNAをそれぞれpGuide-it-ZsGreen1 Vectorにクローニングして作製し、各2.5 μgを用いた。トランスフェクションから48時間後、ZsGreen1の蛍光を蛍光顕微鏡で確認し(A)、FACSでトランスフェクション効率を測定した(B, Transfection efficiency)。ゲノムDNAへの変異導入効率は、PCRベースの変異検出キットであるGuide-it Mutation Detection Kit(製品コード 631443)を用いて調べた(B)。ターゲット配列を含む領域を細胞から直接PCR増幅し、増幅産物を変性、再アニーリングさせてミスマッチを含む二本鎖DNAを作製し、Guide-it Resolvaseでミスマッチ部分を切断した。その後、アガロースゲル電気泳動を行い、デンシトメーターで変異導入の割合を調べた(B, Indel)。

内容

  • pGuide-it-ZsGreen1 Vector (Linear)(製品コード 632601)
    またはpGuide-it-tdTomato Vector (Linear)(製品コード 632602)
  • Guide-it Ligation Components
    DNA Ligation Mighty Mix
    Guide-it Oligo Annealing Buffer
    Guide-it Control Annealed Oligos (100 fmol/μl)
    Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl)
    PCR Grade Water
  • Stellar Competent Cells(製品コード 636763)

保存

Stellar Competent Cells :-70℃
その他:-20℃

この製品を見た人は、こんな製品も見ています。

注意事項
  • 弊社の取扱い製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
  • タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
  • タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。
    また、他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。
  • ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。

▲このページのトップへ