TaKaRa Bradford Protein Assay Kit

TaKaRa Bradford Protein Assay Kitは、Coomassie Dyeを用いるBradford法に基づいたキットで、簡単な操作で迅速に、濃度範囲が1～1,000 μg/mlのタンパク質溶液の定量を行うことができる。
本キットの定量の原理は、Coomassie Dyeがタンパク質と結合することにより、溶液の最大吸収波長が465 nmから595 nm（茶色から青色）にシフトすることによる。この色の変化は、タンパク質量に比例して起こるので、595 nmの吸光度を測定することにより、溶液のタンパク質濃度が定量できる。タンパク質と色素の複合体は、反応開始後5分から60分の間安定である。
本キットは、還元剤の存在下でも測定可能だが、界面活性剤の存在下では測定値が不正確になるので注意が必要である。（共存物質の影響については、「表1． 標準プロトコールにおける各種試薬の許容濃度」を参照。）
また、タンパク質によって発色率が大きく異なるので、注意する。（タンパク質の発色率の比較は、表2：BSAに対する各種タンパク質の発色率を参照する。）

本製品は、標準プロトコールを用いた場合、1 ml反応系において500回、200 μl反応系において2,500回の測定が可能。また、希釈プロトコールを用いた場合、1 ml反応系において1,000回、200 μl反応系において5,000回の測定が可能である。

1．Bradford Dye Reagent　　250 ml×2
2．BSA Standard Solution (2 mg/ml)^＊　　1 ml×10
＊ BSA Standard Solutionは、安定剤として0.9％ NaCl、0.05％ NaN₃を含む。

4℃

本キットは、還元剤の影響は比較的受けにくいが、界面活性剤の濃度が高い場合は、測定に影響を受ける。本キットでの測定に影響がない濃度を表1に示す。

表1． 標準プロトコールにおける各種試薬の許容濃度

タンパク質と色素の結合は、主にタンパク質中の塩基性アミノ酸または芳香族系アミノ酸と色素の結合（特にアルギニンとの結合）によるものである。そのため、タンパク質の種類によって発色率は異なる。図1は、一般的に標準物質として用いられるBSA（Bovine Serum Albumin）とBGG（Bovine Gamma Globulin）の標準曲線である。また、表2に15種類のタンパク質のBSAに対する発色率を示す。


図1．BSAとBGGの標準曲線

表2．BSAに対する各種タンパク質の発色率

タンパク質	Ratio
Albumin, bovine serum（BSA）	1.00
Alcohol Dehydrogenase, Saccharomyces cerevisiae	0.64
Aldolase, rabbit muscle	0.80
Carbonic Anhydrase, bovine erythrocytes	0.89
a-Chymotrypsin, bovine pancreas	0.52
Cytochrome C, bovine heart	1.31
Gamma globulin, bovine（BGG）	0.51
Hemoglobin, bovine	1.01
IgG, rabbit	0.40
IgG, mouse	0.58
Insulin, human	0.84
Lysozyme, chicken egg white	0.73
Myoglobin, equine skeletal muscle	1.15
Ovalbumin, chicken egg white	0.68
Transferrin, human	0.79

＊ Ratio＝（各種タンパク質の吸光度の平均値）／（BSAの吸光度の平均値）

ウェスタンブロッティング実験ハンドブック

ダウンロード

---

　　タンパク質実験の製品選択が簡単！ フローチャート検索をぜひご活用ください。

タンパク質　発現・抽出・精製
タンパク質　定量・電気泳動・ウェスタンブロッティング