ThruPLEX DNA-seq Kitは、ThruPLEXケミストリーを用いて、わずか50 pgの微量DNAからduplicate率が少なく、多様性の高いNGS用ライブラリーを作製するキットである。キットには、イルミナ社次世代シーケンサーに対応したデュアルインデックス（製品コード R400406、R400407）、またはシングルインデックス（製品コード R400427、R400428、R400523）が含まれており、マルチプレックスが可能である。インデックスは、マルチプレート（製品コード R400406、R400407、R400427）、またはチューブ（製品コード R400428、R400523）に分注されている。本キットの操作には、精製やサンプルの移し替えのステップは含まれておらず、同一チューブ、または同一ウェル内で反応を行うことができ、操作は約2時間で完了する。
本製品は、均一なGCカバレッジと分子複雑性の向上により、少ないInput量から再現性の高い結果を得ることができる。また、ゲノムDNA、cell-free DNAなどの生体液由来DNA、FFPE DNA、cDNAなどの二本鎖DNAが使用可能で、ChIP-Seq、RNA-Seqを含む様々なDNA-Seqに利用することができる。更に、主要なTarget Enrichmentプラットフォームにも対応している。

製品名	製品コード	インデックスの種類
ThruPLEX DNA-seq 6S (12) Kit	R400523	6種類	シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 12S (48) Kit	R400428	12種類	シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 48S Kit	R400427	48種類	シングルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 48D Kit	R400406	48種類	デュアルインデックス
ThruPLEX DNA-seq 96D Kit	R400407	96種類	デュアルインデックス

図1. ThruPLEX DNA-seq Kitの1チューブワークフロー
ThruPLEX DNA-seq Kitのワークフローは、エンドリペア、アダプターライゲーション、ライブラリー増幅の3ステップで構成されており、わずか50 pgの二本鎖DNA／cDNAから、インデックスが付加されたライブラリーを調製できる。全操作は1チューブ内で行えるため、サンプルロスを防ぎ、約2時間でライブラリー作製が完了する。


図2．ThruPLEX DNA-seq Kitのテクノロジー

Step 1：	断片化二本鎖DNA(50 pg～50 ng)のエンドリペア
Step 2：	Stem-LoopアダプターのBlunt-endライゲーション Stem-Loopアダプターは5’末端がブロックされており一本鎖部分がないためアダプター同士のアニーリングやライゲーションは起こらず、バックグラウンドを抑えることができる。
Step 3：	ライブラリー増幅 ライゲーション後にStem-Loopアダプターを切断することによってバックグラウンドを抑え、正確性の高いライブラリー増幅を行うことができる。

図3．ライブラリーの多様性とduplicateの割合
各社ライブラリー作製キットを用いてライブラリーを作製し、MiSeq v3 Reagent Kitを用いてライブラリーの多様性とduplicateの割合を比較した。ThruPLEX DNA-seq Kitは少ないinput量からライブラリーが作製でき、多様性が高く（左図）、duplicateの割合も低かった（右図）。


図4．GCカバー率の比較
各社ライブラリー作製キットを用いてヒトゲノムDNA 50 ngよりライブラリーを作製しGCカバー率を調べた。ThruPLEX DNA-seq Kit(左図)は広い範囲で優れたGCカバー率を示した（右図）。赤の縦線はヒトゲノムDNAのGC含量分布を示している。

・Template Preparation Buffer（Red）
・Template Preparation Enzyme（Red）
・Library Synthesis Buffer（Yellow）
・Library Synthesis Enzyme（Yellow）
・Library Amplification Buffer（Green）
・Library Amplification Enzyme（Green）
・Nuclease-Free Water（Clear）
・Indexing Reagent（Blue）or Indexing Plate

• サーマルサイクラー
• 微量高速遠心機
• PCRチューブまたは 96-well PCRプレートとシール
• ピペットチップ
• 80％ (v/v) エタノール
• Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, CAT. no. A63880)

－20℃