サルモネラ菌病原遺伝子の検出
さまざまな種の細菌の熱抽出サンプルを鋳型にPCRを行った結果を示す。
反応液組成
| 専用10×PCR Buffer＊1 | 5 μl |
| dNTP Mixture（各2.5 mM）＊2 | 4 μl |
| Primer-1 | 0.5 μl |
| Primer-2 | 0.5 μl |
| Template DNA＊3 | 5 μl |
| TaKaRa Taq（5 U/μl）＊4 | 0.25 μl |
| 滅菌精製水 | 34.75 μl |
| Total | 50 μl |
＊1 特殊細菌検出用Primer Set（製品コード S001～S028）に添付している。
＊2 TaKaRa Taq（製品コード R001A）に添付している。
＊3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をLB培地中で37℃、一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer（10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0）または滅菌水を90 μl加え、95℃、5分間加熱後、遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
＊4 TaKaRa Taq（製品コード R001A）のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A）も使用できる
PCR条件
| 熱変性 | 94℃、1 min | 35 cycles |
| アニーリング | 55℃、1 min | |
| 伸長 | 72℃、1 min | 72℃、10 min | 1 cycle |
結果
（A）サルモネラ菌invA遺伝子（使用プライマー SIN-1 & 2）
（B）サルモネラ菌エンテロトキシン遺伝子（使用プライマー STN-1 & 2） 図1 サルモネラ菌病原因子遺伝子の検出
3％アガロースゲル（エチジウムブロマイド0.5 μg/lを含む）による電気泳動の結果 C.freundiiにはサルモネラ菌エンテロトキシン遺伝子とホモロジーの高い配列を有する株が存在していると示唆されました。
| Lane M： | φX174-Hinc II digest | Lane10： | Vibrio furnissi |
| 1： | Salmonella typhimurium | 11： | Vibrio fluvialis |
| 2： | Salmonella enteritidis | 12： | Vibrio furnissii |
| 3： | Salmonella choleraesuis | 13： | Vibrio parahaemolyticus |
| 4： | Salmonella infantis | 14： | Vibrio cholerae non O1 |
| 5： | Salmonella thompson | 15： | Vibrio cholerae O1 |
| 6： | Citrobacter freundii | 16： | Escherichia coli |
| 7： | Citrobacter freundii | 17： | Proteus mirabilis |
| 8： | Citrobacter amalonaticus | 18： | Klebsiella oxytoca |
| 9： | Citrobacter freundii | ||
