コレラ毒素遺伝子の検出
コレラ菌（コレラ毒素遺伝子陽性株および陰性株）および毒素原性大腸菌（易熱性エンテロトキシン遺伝子陽性株）を用いた実験例を示す。
反応液組成
| 専用10×PCR Buffer＊1 | 5 μl |
| dNTP Mixture（各2.5 mM）＊2 | 4 μl |
| Primer-1 | 0.5 μl |
| Primer-2 | 0.5 μl |
| Template DNA＊3 | 5 μl |
| TaKaRa Taq（5 U/μl）＊4 | 0.25 μl |
| 滅菌水 | 34.75 μl |
| Total | 50 μl |
＊2 TaKaRa Taq（製品コード R001）に添付している。
＊3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をLB培地中で37℃、 一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer（10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0）または滅菌水を90 μl加え、 95℃、5分間加熱後、卓上遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
＊4 TaKaRa Taq（製品コード R001A）のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A）も使用できる。
PCR条件
| 熱変性 | 94℃、1 min | 35 cycles |
| アニーリング | 55℃、1 min | |
| 伸長 | 72℃、1 min |
結果
図1 コレラ毒素遺伝子の検出
3%アガロースゲル (エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む) による電気泳動の結果
3%アガロースゲル (エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む) による電気泳動の結果
| Lane M： | φX174-Hinc II digest |
| 1～3： | コレラ菌（エルトール・小川型、コレラ毒素遺伝子陽性株） |
| 4～6： | コレラ菌（エルトール・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陽性株） |
| 7： | コレラ菌（古典・小川型、コレラ毒素遺伝子陽性株） |
| 8： | コレラ菌（古典・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陽性株） |
| 9～10： | コレラ菌（non-Ol、コレラ毒素遺伝子陽性株） |
| 11： | コレラ菌（エルトール・小川型、コレラ毒素遺伝子陰性株） |
| 12： | コレラ菌（エルトール・稲葉型、コレラ毒素遺伝子陰性株） |
| 13： | 毒素原性大腸菌（LT遺伝子陽性株） |
