ウェルシュ菌毒素遺伝子の検出
種々のClostridium属の菌の熱抽出サンプルを鋳型にPCRを行った結果を示す。
反応液組成
| 専用10×PCR Buffer＊1 | 5 μl |
| dNTP Mixture（各2.5 mM）＊2 | 4 μl |
| Primer-1 | 0.5 μl |
| Primer-2 | 0.5 μl |
| Template DNA＊3 | 5 μl |
| TaKaRa Taq（5 U/μl）＊4 | 0.25 μl |
| 滅菌水 | 34.75 μl |
| Total | 50 μl |
＊2 TaKaRa Taq（製品コード R001A）に添付している。
＊3 精製DNAまたは熱抽出サンプルを使用。なお、熱抽出サンプルは、菌体をGAMブイヨン培地中で37℃、一晩培養した培養液10 μlにTE Buffer（10 mM Tris-HCl、0.1 mM EDTA、pH8.0）または滅菌水を90 μl加え、95℃、5分間加熱後、遠心機で菌体の残渣を除いた上清液を用いる。
＊4 TaKaRa Taq（製品コード R001A）のほか、TaKaRa Taq Hot Start Version（製品コード R007A）も使用できる。
PCR条件
| 熱変性 | 94℃、1 min | 35 cycles |
| アニーリング | 55℃、1 min | |
| 伸長 | 72℃、1 min |
結果
図1 ウェルシュ菌毒素遺伝子の検出3%アガロースゲル（エチジウムブロマイド0.5 μg/mlを含む）による電気泳動の結果
| Lane M： | φX174-Hinc II digest |
| 1～7： | ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）毒素陽性株 |
| 8～9： | ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）毒素陰性株 |
| 10： | Clostridium difficile |
| 11： | Clostridium sporogenes |
| 12： | Clostridium barati |
| 13： | Negative control |
