Kilo-Sequence用 Deletion Kit

pUC119の Pst I siteにColE1 DNAのPst I断片（約5.3 kbp）をクローニングしたプラスミドを材料とした（図1）。このプラスミドをKpn I 、Xba I で切断し、Kilo-Sequence用Deletion Kitを用いてデレーション操作を行った。図2はExonuclease III で37℃、0～10分間消化後、Mung Bean Nucleaseで処理し、Hind III で切断したものである。ベクターのpUC119はそのままで、挿入されたColE1 DNAのみが１分間におよそ300 bpずつ削られていることがわかる。

図1. ColE1 DNAのPst I断片をクローニングしたpUC119


図2. Exonuclease III、Mung Bean Nucleaseで処理後、Hind III 切断した結果