BcaBEST® RNA PCR Kit Ver. 1.1
ヒト培養細胞HL60株由来total RNAを鋳型としたRT-PCR
■ 方法
鋳 型：ヒト培養細胞HL60株由来total RNA
増幅サイズ：約 1 kb、約 2 kb、約 4.4 kb
ターゲット：トランスフェリンレセプター
逆転写反応液の調製
| 試薬 | 使用量 |
| 2×Bca 1st Buffer | 10 μl |
| MgSO4（25 mM） | 4 μl |
| dNTP Mixture（10 mM） | 1 μl |
| RNase Inhibitor | 0.5 μl |
| BcaBEST Polymerase | 1 μl |
| Oligo dT Primer | 1 μl |
| HL60由来 total RNA（1μg/μl） | 1 μl |
| RNase Free dH2O | 1.5 μl |
| Total | 20 μl |
逆転写反応条件
| 65℃ | 1 min | 1 cycle |
| 30℃ | 5 min |
| ↓gradient | 15 min |
| 65℃ | 30 min |
| 98℃ | 5 min |
| 5℃ | 5 min |
PCR反応
| 試薬 | 使用量 |
| 逆転写反応液 | 20 μl |
| MgSO4（25 mM） | 6 μl |
| 5×Bca 2nd Buffer | 16 μl |
| Bca-Optimized Taq | 0.5 μl |
| 上流プライマー（20 μM） | 1 μl |
| 下流プライマー（20 μM） | 1 μl |
| 滅菌精製水 | 1 μl |
| RNase Free dH2O | 55.5 μl |
| Total | 100 μl |
PCR反応条件
| 94℃ | 30 sec | 30 cycles |
| 55℃ | 30 sec |
| 72℃ | 5 min |
■ 結果
1％ Agarose gel
8 μl／泳動
Lane
M：λ-Hind III digest
1：約 1 kb
2：約 2 kb
3：約 4.4 kb
BcaBEST® RNA PCR Kit Ver. 1.1
