cDNA合成への応用 (Random Primer)
mRNAからcDNAを合成する際、oligo-dTや合成プライマーに代わるプライマーとして用いる。cDNA合成を1チューブ反応で行うことができる。
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1．Random Primerをプライマーとし逆転写酵素により1st strand DNAを合成する。 2．RNaseHでmRNAにニックを入れる。 3．断片化されたRNAをプライマーとしてE. coli DNA Polymerase I により2nd strand DNAを合成する。 4．1st strandのoverhangをT4 DNA Polymeraseで除く。 * 標準的なPrimer使用量： 100 pmol/μg mRNA |
