Application2：ウシFetuin由来N-link糖鎖の分析
（1）N-link糖鎖の分析
ウシFetuinよりヒドラジン分解、N-アセチル化を行いN-link糖鎖を得た。得られた糖鎖をGlycoTAGを用いて2-アミノピリジンで蛍光標識した。PALPAK Type Nを用い、イオン交換モードでHPLC分析を行ったところ、図7のようなパターンが得られたので、図のようにasialo画分～tetrasialo画分をそれぞれ分取した。
図7 ウシFetuin由来PA化糖鎖のHPLC分析
図7 ウシFetuin由来PA化糖鎖のHPLC分析
（2）各画分のシアル酸量の定量
（1）で分取した画分の各約100 pmolを0.05 N HCl 50 μl中、80℃で1時間加熱し、部分酸水解によりシアル酸を遊離させた。キットのプロトコールに従って遊離したシアル酸のDMB標識を行い、HPLC分析した。得られた結果を表2に示した。
（3）各画分の還元末端PA-GlcNAcの定量
前述の方法（Application1：糖タンパク質由来PA化糖鎖スタンダードの分析（4））に従って、（1）で分取した画分の各約100 pmolを酸加水分解、N-アセチル化し、HPLC分析によって還元末端のPA-GlcNAc量を求めた（表2）。シアル酸量をPA-GlcNAc量で割り算し、糖鎖あたりの結合シアル酸の個数を求めたところ、各画分から0.16個、0.98個、1.86個、2.86個、4.26個という結果が得られた（表2）。
表2 ウシFetuin由来糖鎖の糖鎖あたりの結合シアル酸数
表2 ウシFetuin由来糖鎖の糖鎖あたりの結合シアル酸数
| Neu5Ac （pmol/μl） |
PA-GlcNAc （pmol/μl） |
糖鎖あたりの結合 シアル酸数（個） |
|
| Asialo画分 | 1.01 | 6.41 | 0.16 |
| Monosialo画分 | 8.23 | 8.45 | 0.98 |
| Disialo画分 | 26.36 | 14.20 | 1.86 |
| Trisialo画分 | 18.15 | 6.34 | 2.86 |
| Tetrasialo画分 | 7.10 | 1.67 | 4.26 |
