BcaBEST® RNA PCR Kit Ver. 1.1
複雑な二次構造をもつターゲットの増幅
■ 方法
ターゲット：IGFR II遺伝子516 bp（GC含量63.5％）
サンプル：ヒト骨格筋由来全RNA 5 μg/RT液20 μl
逆転写反応液の調製
| 試薬 | 使用量 |
| 2×Bca1st Buffer | 10 μl |
| MgSO4（25 mM） | 4 μl |
| dNTP Mixture（10 mM） | 1 μl |
| RNase Inhibitor | 0.5 μl |
| BcaBEST Polymerase | 1 μl |
| Oligo dT Primer | 1 μl |
| サンプルRNA | 1 μl |
| RNase Free dH2O | 1.5 μl |
| Total | 20 μl |
逆転写反応条件
| 65℃ | 1 min | 1 cycle |
| 30℃ | 5 min |
| ↓ | 15 min |
| 65℃ | 15 min |
| 98℃ | 5 min |
| 5℃ | 5 min |
PCR反応
| A法（通常の方法） |
| 試薬 | 使用量 |
| MgSO4（25 mM） | 6 μl |
| 5×Bca 2nd Buffer | 16 μl |
| Bca-Optimized Taq | 0.5 μl |
| 上流プライマー | 1 μl |
| 下流プライマー | 1 μl |
| 滅菌精製水 | 55.5 μl |
| Total | 80 μl |
| B法 |
| 試薬 | 使用量 |
| MgSO4（25 mM） | 6 μl |
| 2×Bca1st Buffer | 16 μl |
| Bca-Optimized Taq | 0.5 μl |
| 上流プライマー | 1 μl |
| 下流プライマー | 1 μl |
| 滅菌精製水 | 31.5 μl |
| Total | 80 μl |
上記の反応液（80 μl）を逆転写反応終了液（20μl）に別々に加え、以下の条件でPCRを行った。
PCR反応条件
| 94℃ | 1 min | |
| 94℃ | 30 sec | 40 cycles |
| 60℃ | 30 sec |
| 72℃ | 1 min |
| 72℃ | 5 min | |
■ 結果
A法（通常の方法）では増幅産物が得られなかったが、B法では増幅産物が得られた。
レーン
| M | ：100 bp DNA Ladder |
| 1 | ：BcaBEST RNA PCR Kit Ver. 1.1 A法 |
| 2 | ：BcaBEST RNA PCR Kit Ver. 1.1 B法 |
| 3 | ：TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver. 2.1 |
| 4 | ：TaKaRa RNA LA PCR Kit（AMV）Ver. 1.1 |
3％ アガロースゲル
BcaBEST® RNA PCR Kit Ver. 1.1
