3分間ライゲーションの実験例
以下の3つの場合について､それぞれのプロトコールに従って反応液を調製し､従来条件（16℃､30分間）と25℃､3分間の各条件で反応を行い､ライゲーション効率を比較した。
（1）ファージベクターへの外来DNAの挿入（図1）
λgt11/EcoR I Arms（dephosphorylated）へのControl Insert DNA（EcoR I分解プラスミドベクター､2,999 bp）の挿入（25℃､3分間ライゲーション）。
図1 λgt11/EcoR I ArmsへのControl Insert DNAの挿入（25℃、3分間ライゲーション）
図1 λgt11/EcoR I ArmsへのControl Insert DNAの挿入（25℃、3分間ライゲーション）
| レーン 1： | λ-Hind III digest |
| 2： | λgt11/EcoR I Arms |
| 3： | Control Insert DNA |
| 4： | TaKaRa Ligation Kit Ver.1反応液 |
| 5： | TaKaRa Ligation Kit Ver.2反応液 |
（2）リンカーのライゲーション（図2）
pUC118 Hinc II/BAP処理済ベクター（製品コード 3322）とpBgl IIリンカーd［pCAGATCTG］（製品コード 4621P）を用いたリンカーのライゲーション。
図2 pUC118-Hinc II/BAP処理済ベクターとpBgl IIリンカーとのライゲーション
ライゲーション反応液の一部（10 ng DNA）を用い、E. coli JM109 Competent Cells（1.3×108 transformants/μg DNA）を形質転換し、生じた白色コロニーの数より形質転換効率を算出した。
図2 pUC118-Hinc II/BAP処理済ベクターとpBgl IIリンカーとのライゲーション
ライゲーション反応液の一部（10 ng DNA）を用い、E. coli JM109 Competent Cells（1.3×108 transformants/μg DNA）を形質転換し、生じた白色コロニーの数より形質転換効率を算出した。
（3）直鎖状DNAのセルフライゲーション（図3）
pUC118 DNAをHinc II（平滑末端）およびEcoR I（突出末端）で切断した直鎖状DNAのセルフライゲーション。
図3 pUC118制限酵素切断ベクターのセルフライゲーション
ライゲーション反応液の一部（10 ng DNA）を用い、JM109 Competent Cells（1.3×108 transformants/μg DNA）を形質転換し、生じたコロニーの数より形質転換効率を算出した。
これらの結果が示すように､ファージベクターへの外来DNAの挿入､リンカーのライゲーション､突出末端のセルフライゲーションにおいて3分間反応でも従来条件（16℃､30分間）とほぼ同等の結果が得られた。また平滑末端のセルフライゲーションにおいては､今回の条件ではVer. 1を用いた場合に若干の効率の低下は認められるものの､十分な効率が得られることが確認された。
このようにTaKaRa Ligation Kit Ver. 1､Ver. 2ともに25℃､3分間反応でも十分なライゲーション効率が得られ､反応を大幅に簡略化することができる。
図3 pUC118制限酵素切断ベクターのセルフライゲーション
ライゲーション反応液の一部（10 ng DNA）を用い、JM109 Competent Cells（1.3×108 transformants/μg DNA）を形質転換し、生じたコロニーの数より形質転換効率を算出した。
これらの結果が示すように､ファージベクターへの外来DNAの挿入､リンカーのライゲーション､突出末端のセルフライゲーションにおいて3分間反応でも従来条件（16℃､30分間）とほぼ同等の結果が得られた。また平滑末端のセルフライゲーションにおいては､今回の条件ではVer. 1を用いた場合に若干の効率の低下は認められるものの､十分な効率が得られることが確認された。
このようにTaKaRa Ligation Kit Ver. 1､Ver. 2ともに25℃､3分間反応でも十分なライゲーション効率が得られ､反応を大幅に簡略化することができる。
