実験例-1 変異導入効率の確認
【方法】
pUC118DNA 10 pgを鋳型に、「プライマー設計について」で例示した各変異導入（置換、欠失、挿入）用プライマーとPrimeSTAR Maxを用いてPCR（50 μl）を行った。その2 μlをE. coli JM109コンピテントセル（3×108 cfu/μg pUC118）100 μlに添加し、0℃ 30分、42℃ 45秒の処理後SOC培地1 mlを加えて37℃で1時間振とう培養した。そのうち100 μlを選択プレート（LB＋Amp、IPTG、X-gal）上で培養し、白コロニー（変異体）と青コロニー（バックグラウンド）をカウントした。【結果】
表 変異導入効率| 変異のタイプ | 白コロニー | 青コロニー | 変異導入効率 |
|---|---|---|---|
| 置換（3塩基） | 1,948 | 6 | 99.69％ |
| 欠失（3塩基） | 2,024 | 1 | 99.95％ |
| 挿入（6塩基） | 1,280 | 2 | 99.84％ |
※ 6塩基挿入に用いたプライマーは、キットコンポーネントのControl primer FとControl primer Rに相当する。
表に示すようにpUC118 DNA 10 pgを鋳型にした場合、3種類の変異導入体（置換、欠失、挿入）が99％以上の非常に高い確率で取得できることを確認した。
