PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit
増幅鎖長の確認(1ステップRT-PCR)
| 【方法】 |
ヒト心臓由来total RNA またはHL60 細胞由来のtotal RNAを鋳型として(100 ng/50 μl反応系)、ターゲット遺伝子の様々な長さの領域を1ステップRT-PCRで増幅した。 |
| 反応条件: |
50 ℃ |
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30 min. |
| 94 ℃ |
|
2 min. |
| ↓ |
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| 98 ℃ |
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10 sec. |
|
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| 55 ℃ |
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5 or 15 sec. |
30 cycles |
| 72 ℃ |
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1 min./kb |
|
【結果】0.5 - 6 kbで、増幅が確認できた。
| 1:GAPDH |
428 bp |
| 2:Dystrophin |
1 kb* |
| 3:Dystrophin |
2 kb* |
| 4:Dystrophin |
4 kb* |
| 5:Dystrophin |
6 kb* |
| 6:CCND2 |
2.1 kb |
| 7:CCND2 |
2.8 kb |
| 8:TFR |
500 bp |
| 9:TFR |
3 kb |
| 10:TFR |
4 kb |
| 11:TFR |
4.4 kb |
| M1:100 bp DNA Ladder |
| M2:pHY Marker |
| M3:λ-Hind III digest |
* ヒト心臓由来のtotal RNAを鋳型として使用。
他のターゲットはHL60由来total RNAを使用。 |
PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit