One Step TB Green^® PrimeScript™ RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)

(Thermal Cycler Dice Real Time System を使用)
本製品およびPerfect Real Timeサポートシステムで検索・合成したプライマーを用いて、total RNAからHuman HPRT1の検出を行った。

1.方法
Human Liver から調製したtotal RNA 6.4 pg～100 ngおよび滅菌精製水(no template control)を鋳型として、1ステップリアルタイムRT-PCRを行った。

2.結果
PCR増幅産物のリアルタイムモニタリング

反応終了後、増幅曲線の2nd derivativeからCt値を求め、検量線を作成

3.考察
total RNA 6.4 pg～100 ngで目的遺伝子を検出できました。融解曲線から、いずれの鋳型量でも単一の増幅産物が得られていることがわかります。また、検量線の直線性は高く、実験した濃度範囲で正確な定量が可能だと考えられます。