DNA Ligation Kit

（1）λファージベクター〔250 ng（0.01 pmol）〕および、インサートDNA（0.03～0.1 pmol）を含むDNA溶液を用意する*。
（2）（1）のDNA溶液と同量のDNA Ligation Kit Ver.1 のB液（5～10 μl）を添加して、よく撹拌する。
（3）26℃で5～10分間**反応する。
（4）in vitro packagingを行う***。

*	DNA溶液は100 mM Tris-HCl（pH7.6）、5 mM MgCl2、300 mM NaClに調製すること。塩濃度が重要なポイントになるので、TE Bufferの場合でも、必ず終濃度300 mMになるようにNaClを加えること。
**	反応温度は、16℃よりも26℃の方が高い効率が得られる。この反応時間より長く反応しても、かえって効率が落ちる場合があるので、反応は短時間（5～10分間）で行うこと。
***	DNA Ligation Kit溶液は、反応後そのままpackagingに用いることができる。市販のPackaging Kit〔Gigapack（Stratagene社）等〕を使用しても、packagingに用いるDNA Ligation Kitの溶液がpackaging lysateに対して10％以下（容量比）の場合は、DNA Ligation Kit溶液の組成がpackagingを阻害することはない。反応液を全てpackagingに用いる場合は、DNAを一度エタノール沈殿した後、packaging lysateに対して10％以下（容量比）のTE Bufferに溶解して使用すること。