酢酸リチウム法によるSchizo. pombeの形質転換法
pAUR224 DNA（製品コード 3603）
キット以外に必要な試薬
| YEL medium | ： | 5 g Yeast extract, 30 g D-glucose／1 L water |
| YEA agar plate | ： | YEL mediumに2％のagarを加える |
| YEA selective medium | ： | ≧0.5 μg/ml AureobasidinＡ |
| MB medium（1 L当たり） | ： | 5 g glucose, 5 g (NH4)2SO4, 0.5 g KH2PO4, 0.5 g MgSO4ｴ7H2O, 0.36 g CH3COOK, 0.1 g NaCl, 0.1 g CaCl2ｴ2H2O, 1 ml trace elements, 1 ml ビタミン溶液 |
| Trace elements（100 ml当たり） | ： | 500 mg H3BO3, 40 mg CuSO4ｴ5H2O, 100 mg KI, 200 mg FeCl3ｴ6H2O, 530 mg MnSO4ｴ4H2O, 1,000 mg (NH4)6Mo7O24ｴ4H2O, 400 mg ZnSO4ｴ7H2O |
| ビタミン溶液（100 ml当たり） | ： | 1 g nicotinic acid, 1 g myo-inositol, 1 mg biotin, 100 mg pantothenic acid |
| 0.1 M酢酸リチウム（pH4.9） | ： | 酢酸によりpHを4.9に調整後、ろ過滅菌 |
| 50％（w/v）PEG4000 | ： | ろ過滅菌 |
操作手順
- 100 ml MB培地中で酵母を30℃で培養し、OD600＝ 0.2～0.5まで培養する（約15時間）。
- 2,000 rpm、5分間の遠心により菌体を回収する。
- 菌体を滅菌水で洗う。
- 50 OD600ユニット相当の菌体当たり0.8 mlの0.1 M酢酸リチウムを加え、細胞を懸濁する。
- マイクロ遠心チューブに細胞懸濁液100 μlを分注し、30℃で1時間インキュベートする。
- プラスミドDNAを 10 μl（約1 μg）加える。
- 290 μlの50％ PEG4000（30℃保温）を加え、ゆるやかに懸濁する。
- 30℃で1時間インキュベートした後、43℃で15分間インキュベートする。
- 室温で5分間静置する。
- 5,000 rpmで2分間遠心後、上清を完全に除く。
- 菌体を5 mlのYEL培地に懸濁した後、30℃で6時間以上培養する。
- 一部をYEA選択培地プレートに播く。
