ApoPrimer Set (Bcl-2 family)
Standard protocol
TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver 3.0を使用した場合
[RT-PCR反応液組成]
RT mix
| 25 mM MgCl2 |
2 μl |
| 10 ×RNA PCR Buffer | 1 μl |
| 10 mM dNTP mix | 1 μl |
| RNase Inhibitor(40 U/μl) | 0.25 μl |
| AMV RTase(5 U/μl) | 0.5 μl |
| Random 9 mer(50 pmol/μl) | 0.5 μl |
| Positive Control RNA or Sample RNA | 0.5 μl |
| H2O | 4.25 μl |
| total | 10 μl |
PCR mix
| RT反応液 | 10 μl |
| 5×PCR Buffer | 10 μl |
| TaKaRa Ex Taq HS(5 U/μl) | 0.25 μl |
| 各 primer mix(each 10 pmol/μl)* | 1 μl |
| H2O | 28.75 μl |
| total | 50 μl |
* Primer dimer を形成する可能性があるので、94℃,2 min 加熱処理、 急冷した後、使用すること。
[反応条件]
| RT | 30℃ | 10min | 1 cycle |
| 42℃ | 15min |
| 99℃ | 2min |
| 5℃ | 5min |
| PCR | 94℃ | 30sec | 35 cycles |
| 60℃ | 30sec |
| 72℃ | 30sec |
ApoPrimer Set (Bcl-2 family)